文档介绍：实验六α-淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的检测背景:酶在应用过程中存在的问题背景:酶在应用过程中存在的问题①①天然酶对强酸、强碱、高温等天然酶对强酸、强碱、高温等敏感敏感,易失活,易失活②②难回收难回收,提高了生产成本,提高了生产成本③③反应后酶反应后酶混在产物中混在产物中,影响产品质量,影响产品质量将水溶性的酶用将水溶性的酶用物理或化学的方法物理或化学的方法固定在某种固定在某种介质上,使之成为介质上,使之成为不溶于水不溶于水而又而又有酶活性有酶活性的制剂。的制剂。固定化酶固定化酶基础知识: 酶的固定化技术酶固定化的方法: a、吸附法: 将酶吸附到固体吸附剂表面的方法, 如: 活性碳、多孔玻璃、石英砂等固体吸附剂酶 d、包埋法: 将酶包裹在凝胶交联后的格子中 c、交联法: b、共价偶联法酶的某些基团(如氨基末端、羧基末端)与载体共价结合。利用试剂与酶之间发生分子交联来把酶固定化的方法。 a、吸附法: 实验六α-淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的检测实验目的: 1. 掌握α-淀粉酶的固定化 2. 检测固定化检测固定化αα- -淀粉酶的效果淀粉酶的效果实验设备和材料: 38 页— 39 页固定化酶柱气门心夹子 5ml 注射器 -淀粉酶的固定化吸附 5mg α-淀粉酶+4ml 蒸馏水+5g 石英砂, 搅拌 30min 装入下端接有气门心并用夹子封住的注射器中用10倍柱体积的蒸馏水洗涤除去游离淀粉酶(1mL/min) 装柱洗柱如何证明淀粉酶已全部被固定? 蒸馏水洗柱流出的水+淀粉, 保温几分钟后+KI-I 2变蓝说明水中无游离的淀粉酶,已全部固定固定化装置—反应柱淀粉淀粉αα- -淀粉酶淀粉酶糊精糊精ββ- -淀粉酶淀粉酶葡萄糖葡萄糖糖化淀粉酶糖化淀粉酶麦芽糖麦芽糖遇碘显蓝色红色实验原理: 2、淀粉水解的检测一定浓度的淀粉流经固定化酶柱后,可使淀粉水解成糊精,流出物用 KI-I 2溶液测试呈红色。枯草杆菌的α-淀粉酶: 最适温度为 50-75 ℃;最适 - 溶解淀粉 50mg 淀粉溶于 100ml 热水中,搅拌均匀过柱使淀粉溶液以 的流速过柱,在流出 5ml 淀粉后接收 流出液。检测加入 1-2 滴KI-I 2溶液,观察颜色变化。用水稀释1倍后再观察颜色。保存及再次使用 10倍柱体积蒸馏水洗涤此柱,放置 4℃冰箱保存,几天后取出重复实验。实验步骤: 让淀粉和固定的αα- -淀粉酶充分反应 实验结果 1 2 3 4 1、水+1~ 2滴 KI-I 2溶液 2、淀粉液+1~ 2滴 KI-I 2溶液 3、流出液+1~ 2滴 KI-I 2溶液 4、稀释 1倍的流出液+1~ 2滴 KI-I 2溶液