文档介绍：免疫组化5-结果的分析和判断
Click here to modify the text , you may post text here . Click here to modify the text . Click here to m免疫组化5-结果的分析和判断
Click here to modify the text , you may post text here . Click here to modify the text . Click here to modify the text , you may post text here
Name：Ares
Date：16 Feb
2021
一、 免疫组化结果的判断原则
⒈必须同时设对照染色。没有对照染色的免疫组化染色结果是不可信的。
⒉抗原表达必须在特定部位。如LCA应定位在细胞膜上；CK应定位在细胞浆内；
PCNA及p53蛋白应定位在细胞核内；EMA应定位在细胞膜上，等等。不在抗原所在部位的阳性着色，一概不能视为阳性。
⒊阴性结果不能视为抗原不表达。由于检测方法灵敏度有高低之分，有时可因染色方法灵敏度不够，而导致阴性反应，判断时应注意。
⒋尽量避开出血、坏死及切片刀痕和界面边缘细胞的阳性表达，特别是酶免疫标记。因为这类阳性着色多系内源干扰，或系人为因素所致。
⒌对免疫组化标记结果的意义不能绝对化，应结合临床资料、X线等影像学及实验结果综合分析。
二、对照染色设计
(一）对照染色的目的
---排除假阴性和假阳性。
假阴性的原因主要有三：
①组织处理不当，抗原丢失过多或被遮蔽
②抗体失活、效价过低或稀释度不合适（主要指一抗，即特异性抗体）
③染色步骤遗漏及差错，或显色剂的选择、缓冲液的pH和离子强度不当等。
假阳性系由多种因素造成的非特异着色所致，原因主要有：
①自发荧光或内源酶等干扰
②抗体试剂不纯(特别是一抗）
③操作失误，如污染、切片干枯或显色剂操作不当等
④Fc受体的干扰，等等
（二）对照的种类及其选用目的
对照染色大致可分为：阳性组织对照、阴性组织对照及阴性试剂对照和自身对照四大类：
⑷抑制试验 是指用标记抗体和未标记抗体（可以是一抗，也可以是二抗或桥抗体）两者的混合物作试剂，其他步骤不变的免疫组化染色试剂对照，结果其阳性着色应成比例的减弱（等量或1：9）。此试剂对照多用于直接法。
这类阴性试剂对照的选用原则是：①空白对照不能省，其他对照在预实验中应尽量多做，尤其是应用新抗体试剂②对照必需与实验片同步进行染色
③对照的结果应附合要求。
⒋自身对照 是指在同一标记切片上的自身组织成分的阴性背景对照。即与靶抗原阳性反应细胞或成分相邻的阴性背景结构的显色，结果应为阴性或着色较浅，需与阳性着色成分呈鲜明对比
目的：排除内源性干扰产生的假阳性和因抗原弥散移位造成的错误结果。
三、非特异染色
非特异染色是指免疫组化染色过程中产生的非靶抗原的呈色结果，属假阳性，又称背景着色，能严重干扰免疫组化染色结果的正确判断，应竭力避免或减轻。
①内源性干扰(自发荧光、内源酶、内源性生物素等)；
②试剂污染(质量差，交叉反应，Fc受体干扰等)；
③组织处理不当(组织固定不及时或固定不良所导致的抗原弥散移位、洗涤不充分所导致的游离试剂残留等)。
原因：涉及免疫组化染色流程的各个环节：
纠正的方法视原因而异，可在预实验基础上，采用有针对性的纠正对策，对症下药。
四、阳性标记的形态
特征和判断
免疫组化标记具有一定形态特点，若能熟练掌握则有助于对免疫组化标记结果的正确判断。内容包括定性、定位和定量三方面。
定性定量指标---免疫显色强度和阳性细胞密度（抗原含量）
定位指标---阳性细胞的着色形态及组织分布特点（功能）
（一）阳性标记免疫特征：分"弱(+)、中(++)、强(+++)"三级。免疫荧光法（FITC为例） 则表现为浅绿色荧光、明显绿色荧光和亮绿色耀眼荧光；
免疫酶标记（HRP- DAB/H2O2）则表现为淡黄色细颗粒、棕黄色颗粒和褐黄色粗颗粒，后者耀眼易见。图像摄影，原则上多取强阳性区域。
（二）阳性标记细胞学特征（以HRP-DAB/H2O2为例） 可分为①胞膜型；②胞核型；③胞质(浆)型；④微绒毛型和⑤复合型（胞膜-胞质兼有，胞核-胞质兼有，或微绒毛-胞质兼有）等五种阳性细胞类型。这与抗原所在部位相关联，但应注意排除因组织固定不好引起的抗原弥散假象，尤其是复合型图像。
（三）阳性标记组织