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65-人巨细胞病毒核酸检测标准操作程序.docx

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65-人巨细胞病毒核酸检测标准操作程序.docx

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文档介绍

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65-人巨细胞病毒核酸检测标准操作程序
北京泰普舜康医学检验所作业指导书 编号:BJTIB-SO损导致液体外漏以及过期试剂,应刚好更换。 质控品
质控品来源:随试剂盒,由厂家供应。 质控品保存条件:置于-20℃冰箱中保存。 质控频度:每次试验均需做质控。 操作过程说明 DNA提取
质控品处理:分别取出阴性、阳性质控品,8000rpm离心数秒,,瞬时离心后95℃干浴2min,马上冰浴2-5min后13000 r/min离心1min,上清 液用于PCR扩增。 样本处理 样本处理
取全血500ul至枯燥玻璃试管中,参加生理盐水500ul轻摇混匀; 取枯燥玻璃试管参加1ml淋巴细胞分别液;
将稀释好的全血用移液器缓慢参加加有淋巴细胞分别液的试管中(留意沿着管壁,速度要慢);
2000rpm离心20分钟〔建议用水平离心机〕;
吸取白细胞层(从上往下其次层),,12000rpm离心5分钟; 去上清,沉淀中参加50ulDNA提取液充分混匀,101℃恒温处理10±1分钟;










12000rpm离心5分钟,上清备用。
加样: 从4℃冰箱取出处理好的样本以及质控品转移至加样区,取上清液5ul加至PCR 反响管进展PCR扩增。
Mx3000P荧光定量PCR仪的设置及结果分析 翻开计算机电源。
北京泰普舜康医学检验所作业指导书 编号:BJTIB-SOP-PCR064
人巨细胞病毒核酸定量检测标准操作规程〔荧光PCR法〕 第一版
第0次修改 将Mx3000P电源开关翻开,在大约1分钟的时间内,仪器将会自检并且能听到滤镜轮转动的声音。翻开电脑上的Mx3000P软件,确定软件界面右下面的联机标记呈现绿色
。假如不是绿色而是红色,软件会提示
要接着稍等片刻,待仪器自检完成,会自动连接计算机。
,这时只需
在软件的弹出框中选择您要进展的试验类型,
一项“Quantitive PCR〔Multiple Standards〕”进展肯定定量分析。 确定卤钨灯已经翻开。钨灯正在预热;










(绿色)那么说明卤钨灯已经翻开;
通常选择第
〔黄色〕那么说明卤
〔红色〕那么说明卤钨灯没有被翻开,这时须要用鼠标点击这个标记将
〔绿色〕。
光源翻开。在卤钨灯已经被翻开的状况下, 最好在仪器与光源预热20分钟后起先试验。 在
里,对所选孔进展设定,在Well type中设定Standard
〔标准 品〕、NTC〔阴性参照〕、unkown〔样品〕等,并选择正确的荧光通道〔FAM, HEX, ROX,Cy5〕,参比荧光〔Reference dye〕选None。对于标准品,在Well type中设定为“Standard”后,再设定其模板浓度。方法为:点击可以干脆点击
,10倍的浓度梯度
,在下拉菜单中选择不同的系数关系后,依次点击设定为
标准品的另外几个孔,浓度将实时显示。也可以干脆点击标准品的各个孔位, 在
一栏,手