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本模板有完整的思路及框架，更贴近实用
肿瘤标记物2
发光信号检测
光敏二极管、光敏电池、光电偶合器（CCD）
结构简单、性能稳定
但灵敏度低、线性范围较窄。
主要特点
原理
光信号
光电转换器浓度
相关系数≥
间接法原理
包被体
待测抗体
包被抗原
标记抗体
（二抗）
俘获法原理
俘获抗体
（二抗）
待测抗体
标记抗原
包被体
双抗原夹心法原理
包被体
待测抗体
包被抗原
标记抗原
间接包被夹心法原理
包被体
待测抗原
包被连接物
标记抗体
俘获抗体
特点：所有试剂盒均采用同一包被物和包被工艺
发光免疫分析基本操作步骤（一步法）
待测样品
标记抗体或抗原
洗涤去除未结合的反应物
发光底物
仪器检测
包被抗体或抗原的反应管
反应30-60分钟
反应0-5分钟
发光免疫分析基本操作步骤（二步法）
待测样品
洗涤去除未结合的反应物
发光底物
仪器检测
包被抗体或抗原的反应管
反应30-60分钟
反应0-5分钟
标记抗体或抗原
洗涤去除未结合的反应物
反应30-60分钟
发光免疫分析技术
的现状及应注意的问题
目前已商品化的光生物学标记检测技术整体性能比较
技术类型
标记、反应体系
主要优点
主要不足
化
学
发
光
酶促
过氧化物酶、鲁米诺、氧化剂、增强剂等
测量方式简单（速率法）成本较低、灵敏度较高
工作曲线随时间漂移低端斜率呈非线性下移
螺旋金刚烷环氧化物、碱性磷酸酶
测量方式简单（速率法）灵敏度较高
非酶促
吖啶酯、过氧化氢
灵敏度较高
试剂成本高、发光时间短测量方式复杂（积分法）需原位进样(In Situ Injector)仪器成本及维护费用较高试剂成本较高
时间分辨荧光
铕（Eu）、镝(Dy)、钐（Sm）、铽（Tb）、等络合物脉冲光源激发
灵敏度较高、试剂较稳定
测量方式复杂（脉冲激发、间歇式测量、流动池）仪器成本及维护费用高环境及样品中同类元素可导致本底干扰
电化学发光
钌(Ru)的络合物脉冲电场激发
时间分辨荧光（也称时间延迟光致发光）：Time Resolved Fluorescence
（Time Delayed Photoluminescence）解离增强荧光免疫分析（DEFIA）
电化学发光（也称场致发光）：Electrochemiluminescence（Electroluminescence）
化学发光：Chemiluminescence
例如：
原因在于抗体的亲合力，而不是检测技术。
筛选抗体、屏蔽干扰，生产工艺、管理水平和技术服务是试剂生产的关键
这些发光检测技术的灵敏度及线性范围都已经接近了免疫反应的极限。
灵敏度的瓶颈在于抗体亲合力和干扰免疫反应的因素，而不是检测技术。
片面宣扬检测技术灵敏度和线性范围的强弱，不仅毫无意义，而且也是荒谬的。
发光技术——
临床免疫分析划时代的进步
以TSH(促甲状腺素)为例
第一代
TSH检测试剂盒
普通放免
功能灵敏度1-2mIU/L
基本无法测到
正常值下限以下
的血清TSH浓度
对甲亢的诊断意义不大
固相放免
功能灵敏度
-
在甲亢的诊断中
开始发挥作用
第二代
TSH检测试剂盒
发光免疫
功能灵敏度
-
成为甲亢诊断的
首选指标之一
发光免疫
功能灵敏度
-
一系列新的临床现象
改写了垂体甲状腺轴
的调控状态
第三代
TSH检测试剂盒
第四代
TSH检测试剂盒
目前商品化发光免疫分析产品的几个特点
大多采用全自动工作方式，部分采用微孔板半自动方式
多数采用磁性或非磁性微粒包被，以增加表面积，使灵敏度进一步提高，反应时间大大缩短
使用内建标准曲线加校正的办法产生工作曲线
部分产品采用流动池测定方式(适合于闪光型发光或电化学发光)
流动池检测方式示意图
检测器
检测池
负压泵
废液
四通阀
冲洗液
样品管
计量泵
干燥空气
原位进样泵
氧化剂
使用商品化发光免疫分析产品
可能遇到的几个问题
与以往方法（放免等）在检测指标的正常值及临床意义上的差异。
如：免疫源性胰岛素与真胰岛素、HCG、性激