文档介绍：微生物学课件22
显微镜放***——细菌形体微小，肉眼不能直接看到，必须借助显微镜（普通光学显微镜、电子显微镜）放大后才能观察。
染色检查法——细菌体小,半透明，经染色后才能观察较清楚。
普通光学显微镜的分辨率为
微生物学课件22
显微镜放***——细菌形体微小，肉眼不能直接看到，必须借助显微镜（普通光学显微镜、电子显微镜）放大后才能观察。
染色检查法——细菌体小,半透明，经染色后才能观察较清楚。
。，故可用普通光学显微镜观察。
１、普通光学显微镜(light microscope)
一、显微镜放***
电子显微镜的分辨率为1nm。不仅能看清细菌的外形，内部超微结构可一览无余。
２、电子显微镜(electron microscope)
肺炎链球菌荚膜
荚膜
一、显微镜放***
3、透射电镜
4、扫描电镜
二、染色检查法
由于细菌细胞微小又透明，一般先要经过染色才能作显微观察
革兰氏染色法
细菌染色
鉴别染色法
简单染色法
负染色：
正染色
死菌
活菌
抗酸性染色法
芽孢染色法
姬姆萨染色法
荚膜染色法
用美蓝或TTC等作活菌染色
（一）单染色法
1、原理
细菌的体积小，五色半透明，在普通光学显微镜下不易观察清楚，通常需染色来增加菌体与背景之间的色差，这比不染色标本清楚易辨。
由于细菌的等电点为pH2～5，在接近中性的环境中通常带负电荷，易与带正电荷的碱性染料相结合而染上颜色，故常用亚甲蓝、碱性复红、草酸铵结晶紫等染料染色。单染法只使用一种染料，所染的细菌均被染成一种颜色，一般能够显示细菌的形态、排列和大小，但不能显示细菌的内部构造。
２、常用染料和器具
大肠杆菌和金黄色葡萄球菌18～24h培养物，生理盐水，亚甲蓝染色液，碱性复红染液，香柏油，二甲苯，显微镜，接种环，吸水纸，载玻片，酒精灯，擦镜纸。
３、方法
（1）涂片
取洁净的载玻片一块，滴一小滴生理盐水于载玻片中央(如被检材料是液体，可不加生理盐水)。将接种环在酒精灯火焰上灭菌，冷却后，伸人被检菌试管取菌少许(切不可多，更不可将培养基刮下)，混入载玻片上的生理盐水中，磨匀并涂抹成直径1．5cm左右的均匀薄层菌膜。将接种环灭菌后放回原处。
（2）干燥
涂片最好在室温中让其自然干燥。有时为了干燥得快些也可在酒精灯火焰上方烘干，但勿紧靠火焰；也可以用吹风机吹干。
A
B
B
B
A
B
A
A
（1）初染（结晶紫30S）
革兰氏染色程序和结果
（1）初染（结晶紫30S）
（2）媒染剂（碘液30S）
（3）脱色（95%乙醇10~20S）
（4）复染（蕃红30 ~ 60S）
A
B
B
B
A
B
A
A
革兰氏染色程序和结果
（2）媒染剂（碘液30S）
（1）初染（结晶紫30S）
（2）媒染剂（碘液30S）
（3）脱色（95%乙醇10~20S）
（4）复染（蕃红30 ~ 60S）
A
B
B
B
A
B
A
A
革兰氏染色程序和结果
（3）脱色（95%乙醇10~20S）
（1）初染（结晶紫30S）
（2）媒染剂（碘液30S）
（3）脱色（95%乙醇10-20S）
（4）复染（蕃红30 ~ 60S）
A
B
B
B
A
B
A
A
革兰氏染色程序和结果
（4）复染（蕃红30 ~ 60S）
A：革兰氏阳性细菌G+
B：革兰氏
阴性细菌G﹣
为什么？
（1）初染（结晶紫30S）
（2）媒染剂（碘液30S）
（3）脱色（95%乙醇10~20S）
（4）复染（蕃红30 ~ 60S）
２、染色原理
第一步：结晶紫使菌体着上紫色
第二步：碘和结晶紫形成大分子复合物，分子大，能被细胞壁阻留在细胞内。
第三步：酒精脱色，细胞壁成分和构造不同，出现不同的反应。
G+ 菌：细胞壁厚，肽聚糖含量高，交联度大，当乙醇脱色时，肽聚糖因脱水而孔径缩小，故结晶紫-碘复合物被阻留在细胞内，细胞不能被酒精脱色，仍呈紫色。
Gˉ菌：肽聚糖层薄，交联松散，乙醇脱色不能使其结构收缩，因其含脂量高,乙醇将脂溶解，缝隙加大，结晶紫-碘复合物溶出细胞壁，酒精将细胞脱色，细胞无色，沙黄复染后呈红色。
３、结果判断
菌体呈紫色的为革兰氏阳性菌（G+）
菌体呈红色的为革兰氏阴性菌（G-）
阳性菌
阴性菌
革兰阳性 革兰阴性
４、注意事项
（1）载玻片要洁净无油。
（2）