蛋白质含量测定法.ppt

文档介绍：蛋白质含量测定法
图1 考马斯亮兰标准法
图1 考马斯亮兰标准法
微量法的数据和图
表2 考马斯亮兰微量法实验表格
管号**********标准蛋白质（）
图1 考马斯亮兰标准法
图1 考马斯亮兰标准法
微量法的数据和图
表2 考马斯亮兰微量法实验表格
管号**********标准蛋白质（）（）-
根据表2，以A595为纵坐标，标准蛋白质量/（μg）为横坐标，作图2。
图2 考马斯亮兰微量法
SDS干扰数据和图
表3 考马斯亮兰SDS干扰实验表格
管号123456标准蛋白质（） (1mg/ml)-
根据表3，以A595为纵坐标，SDS浓度为横坐标，作图3。
图3 考马斯亮兰SDS干扰实验
由上图可以看出，十二烷基硫酸钠(SDS)对考马斯亮兰法测蛋白质含量有干扰，，但随着SDS浓度的增加，其混合液的595nm处的吸收峰逐渐降低，而后有一小段回升，最后趋于渐近线。
紫外吸收法
[实验原理]
280nm的光吸收法：蛋白质分子中，酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸在280nm处有最大吸收。
215nm与225nm的吸收差法：蛋白质因为含量低而不能使用280nm的光吸收测定时，可用215nm与225nm吸收值之差，通过标准曲线法来测定蛋白质稀溶液的浓度。
肽键测定法：蛋白质溶液在238处的光吸收强弱，与肽键的多少成正比。可以测238nm处吸收值，通过标准曲线法来测定蛋白质稀溶液的浓度。
[器材与试剂]
（一） 器材
1．SPECORD200分光光度计
2．漩涡混合器
3．试管12支
（二） 试剂
标准蛋白质溶液，用牛血清清蛋白（BSA），。
[实验数据与结果分析]
（一）紫外280nm吸收法数据和图
表4 紫外280nm光吸收法
管号123456BSA ()（mg/ml）
根据表4，以A280为纵坐标，SBA浓度为横坐标，作图4。
图4 紫外280nm光吸收法
根据直线拟和方程y=+（牛血清清蛋白）
。
紫外215nm与225nm的吸收差法的数据和图表5 紫外215nm与225nm的吸收差法
管号123456未知BSA ()(μg/ml)△
根据表5，以吸收差△为纵坐标，蛋白质浓度为横坐标，作图5。
图5 215nm与225nm吸收差法
肽键测定法
表6 肽键吸收法
管号123456未知BSA () (μg/ml)
根据表6，以A238为纵坐标，蛋白质浓度为横坐标，作图4。
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