文档介绍：血清蛋白的分离——
一、垂直板聚丙烯酰***凝胶电泳
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（1）安装夹心式电泳槽
将长短玻璃板分别插到U形硅橡框的凹形槽中（注意勿用手接触灌胶面的玻璃），在长玻璃板下端与硅胶橡框交界的缝隙内加入已血清蛋白的分离——
一、垂直板聚丙烯酰***凝胶电泳
：
（1）安装夹心式电泳槽
将长短玻璃板分别插到U形硅橡框的凹形槽中（注意勿用手接触灌胶面的玻璃），在长玻璃板下端与硅胶橡框交界的缝隙内加入已融化的1%琼脂糖且两玻璃板内下端处处有琼脂糖（其目的是封住空隙，凝固后的琼脂中应避免有气泡），琼脂凝固后，将硅胶橡框装入电泳槽内，以对角线的方式将螺丝帽旋紧。
实验步骤
试剂名称
用量（ml)
分离胶缓冲液（）
分离胶凝胶贮液
蒸馏水
将以上三种试剂混合均匀后，置于真空干燥器中
抽气10min
过硫酸铵，置于真空干燥器中，抽气10min
（2）分离胶的制备
按上表格配胶，二者抽气后混合均匀，小心不要在溶液中搅出气泡，以免过多接触空气。
迅速用滴管将混合后的分离胶装在二块玻璃板之间至短板上端约3-4cm，并用注射器在起上面加一层水约1mm使凝胶形成时有一水平面，（注意加水时，不要引起胶面的大波动）。
在室温中放置，当两界面出现不同折射率时表明已凝胶，时间大约40 分钟，以出现折射率不同的界面为准，再室温下放置十分钟，使凝胶充分。
将分离胶上层的水倒去，再用滤纸吸去多余的水（注意不要碰破胶面），为下一步做准备。
试剂名称
用量（ml)
浓缩胶缓冲液（)
浓缩胶贮液
40%蔗糖
将以上三种试剂混合均匀后，置于真空干燥器中，
抽气10min
核黄素
(3)浓缩胶制备：
按上表所示配胶，,混匀，，插入加样梳，放于日光灯下10 分钟左右浓缩胶就开始凝胶，30~50分钟左右凝好（凝缩胶变为乳白色为准），凝好后小心拔去加样梳。
将 Tris—甘氨酸电极缓冲液稀释10 倍后倒入电泳装置的左、右槽中，短玻板一侧要稍微超过玻板，长玻板一侧只要越过电泳丝的高度。
用微量注射器通过缓冲液在每个加样凹槽中加入约5ul的样品。
将样品端(短玻璃的一边)接直流稳压电泳仪的负极，接通冷却水，开始电泳。
开始时电流控制在10mA，待样品进入分离胶时，将电流调至30mA左右。 左右时，电泳完成。
将缓冲液回收至试剂瓶中，还可用1-2 次（注意将正负级的缓冲液分开回收）。
将固定螺丝旋松，取出硅橡胶框，将一块玻璃板轻轻剥开，然后用玻璃棒将胶板取下放入培养皿中。
，染色
在培养皿中倒入氨基黑染色液至覆盖胶板，染色分钟左右，此时染色与固定同时进行。（染色液要回收利用）
用 7%乙酸浸泡数次，直至背景蓝色脱去。
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（1）安装圆形玻管
将洗净的玻璃管烘 干后用橡胶玻璃头封 严，放置在一边等待 灌胶。
二 圆盘聚丙酰***凝胶电泳
(2) 分离胶制备
按垂直板的方案进行配胶，混匀后迅速用滴管分装在玻璃管中至玻璃管上端约2-3cm，并用注射器在起上面加一层水约1mm使凝胶形成时有一水平面，在室温中放置，当两界面出现不同折射率是表明已凝胶，将分离胶上层的水倒去，再用滤纸吸去多余的水（注意不要碰破胶面），为下一步做准备。
(3) 浓缩胶制备（同垂直板）：
按垂直板的方案进行配制，配制好后，立即加入到已配制好的分离胶上面至短玻璃板上端约1cm，然后放于日光灯下10 分钟左右浓缩胶就开始凝胶，30~50 分钟左右凝好（凝缩胶变为乳白色为准）。
将 电极缓冲液稀释10 （注意需没过玻璃管的上下端），用微量注射器通过缓冲液在每个玻璃管的凝胶表面加约5ul 的样品
将样品端(上槽)接直流稳压电泳仪的负极，下槽接直压电泳仪的正极。开始时电流控制在1-2mA/管，待样品进入分离胶时，将电流调至5mA 左右/管。当蓝色染料迁移至距离玻