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分子生物学实验报告
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分子生物学试验报告
专业：****** 班级：*** 指导教师：** 学生姓名：*** 书目：细菌染色体DNA缠绕附着在细胞壁碎片上，离心时易被沉淀出来，而质粒DNA那么留在清液中。用乙醇沉淀、洗涤，可得到质粒DNA。
质粒DNA的相对分子量一般在106－107范围内，×106，×106。在细胞内，共价闭环DNA〔covalently closed circular DNA，简称cccDNA〕常以超螺旋形式存在。假如两条链中有一条链发生一处或多处断裂，分子就能旋转而消退链的张力，这种松弛型的分子叫做开环DNA〔open circular DNA，简称ocDNA〕。在电泳时，同一质粒如以cccDNA形式存在，它比其开环和线状DNA的泳动速度快，因此在本试验中，自制质粒DNA在电泳凝胶中呈现3条区带。
二、试验目的
1．驾驭最常用的提取质粒DNA的方法和检测方法。 2．了解制备原理及各种试剂的作用。 三、试验材料和试剂
材料：，含pBR322质粒。 试剂：
1. LB造就基：10g/L胰蛋白胨，5g/L酵母提取物，10g/L NaCl，。如固
体造就基那么添加15g/L琼脂。
2. 溶液Ⅰ〔〕：50 mmol/L葡萄糖，25mmol/LTris-HCl，10mmol/L EDTA。灭菌后
存放。
3. 溶液Ⅱ〔(内含1％SDS)〕：预先配制1％SDS母液，临用前一天晚上参加
，4℃保存。
4. 溶液Ⅲ〔〕：5mol/L乙酸钾60mL、、。 5. 酚/***仿液(V/V＝1/1)：酚为重蒸酚，配制时，先将***仿中参加异戊醇，使其体积比为24:1，然后等
量的参加重蒸酚，混匀，-HCl ()抽提几次以平衡这一混合物，于棕色瓶中存放， mol/LTris-HCl()，4℃保存。
完备格式
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6. 无水乙醇 7. 70％乙醇
8. TE缓冲液：10mmol/LTris-HCl、1mmol/LEDTA，其中含RNA酶20μg/mL。 仪器：
恒温造就箱、恒温摇床、超净工作台、高压蒸汽灭菌锅、台式高速离心机、台式小型振荡器、EP管()、加样器(20uL～lmL)、吸头。 四、操作步骤 〔一〕造就细菌
将带有质粒pBR322的大肠杆菌接种在含50μg/mL氨苄青霉素(Amp)的LB液体造就基中，37℃振荡造就过夜。留意：添加Amp时，须待LB造就基冷却到50℃左右方可参加。 〔二〕从菌落中快速提取制备质粒DNA
1． Ep管中，7500rpm离心1min。
2．弃上清，参加150μL GET缓冲液，在涡旋混合器上充分混匀，在室温下放置10min。
3． NaOH(内含1％SDS)，加盖，颠倒〔不要振荡〕2～3次，使之混匀，冰上放置4min，最多不能超过5min。
4．参加150μL冰冷的乙酸钾溶液。加盖后，颠倒数次使之混匀，冰上放置15min。
5．4℃，101