超氧化物歧化酶SOD活性测定.ppt

文档介绍：超氧化物歧化酶SOD活性测定
四、仪器设备
研钵；玻璃试管; 40W荧光灯; 移液管等。
五、试剂配制
1、提取介质─50mmol/L()磷酸缓冲液。
2、反应介质─50mmol/L()磷酸缓冲液,超氧化物歧化酶SOD活性测定
四、仪器设备
研钵；玻璃试管; 40W荧光灯; 移液管等。
五、试剂配制
1、提取介质─50mmol/L()磷酸缓冲液。
2、反应介质─50mmol/L()磷酸缓冲液, , EDTA, 。
3、: EDTA的50mmol/L()的磷酸缓冲液配制。
SOD反应混合液


六、植物材料:
玉米叶片:
完全液培养苗
缺素液培养苗
七、操作步骤
将玉米叶片剪细─→
混合均匀→
(用保鲜膜包好放低温
冰箱预冻)
→研磨成匀浆→再加入3ml缓冲液,研磨均匀后, 将匀浆液倒入聚乙烯离心管中→低温(0～4℃)下、4800rpm离心10min─→上清液即为酶液，将上清液倒入小青霉瓶，低温下贮存，供SOD活性测定。
1、酶液的提取：
加入2ml冰冷的

磷酸缓冲液及少量的石英砂
研钵
 ：
取6支试管, 编号, 按下表加入试剂。将1号管用黑纸袋套上, 与其它试管一起放荧光灯下, 光强3000Lx照光10min, 到时间后关灯, 用黑布罩上试管(如室内光线不强, 不罩黑布也可), 以1号试管溶液为参比, 测定样品在560nm处的吸光度。不加酶的2号试管溶液颜色最深; 加入酶的由于SOD抑制了硝基四唑蓝的光还原,颜色变浅。
2、活性测定：
取6支干燥的、玻璃质量一致的普通试管，按下表顺序加入试剂
式中：Ack为2号对照管溶液在560nm处的吸光度值;
AE为样品测定管溶液在560nm处的吸光值;
V为酶液总体积（ml)；
W为提取酶液的植物材料的鲜重（g)；
Vt为测定时酶液的用量(ml)。
八、结果计算：
（Ack-AE)×V
SOD活性(U/g鲜重)＝───────────
Ack×W×Vt×50％
一个酶活单位定义为将硝基四唑蓝的还原抑制到对照一半(50％)时所需的酶量。
九、注意事项:
。包括厚度、直径、质量等。
。照光时试管放的高度、背景等。
。
4. 植物组织中的酚类物质对测定有干扰，对酚类含量高的材料提取酶液时可加入聚乙烯吡咯烷酮消除。
。
十、思考题:
。
？应如何克服？
Louiechot