文档介绍：进展-细胞死亡
Apoptosis
IMPACT FACTOR (2013) :
Apoptosis is an international peer-reviewed journal devoted to the r膜完整但出现发泡现象，细胞凋亡晚期可见凋亡小体。
染色细胞：常用姬姆萨染色、瑞氏染色、苏木精染色等。凋亡细胞的染色质浓缩、边缘化，呈新月状附在核膜周围。
荧光显微镜和共聚焦激光扫描显微镜
一般以细胞核染色质的形态学改变来评判细胞凋亡的进展情况。常用的DNA特异性染料有：Hoechst 33342; Hoechst 33258; DAPI。
电子显微镜观察
（PS）外翻分析
（Annexin V法）
磷脂酰丝氨酸（Phosphatidylserine, PS）正常位于细胞膜的内侧，在凋亡早期，PS可从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表面，暴露在细胞外环境中。Annexin-V是一种分子量为3536KD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，能与PS高亲和力特异性结合。将Annexin-V进行荧光素（FITC、R-PE）或biotin标记，以标记了的Annexin-V作为荧光探针，利用流式细胞仪、荧光显微镜以及共聚焦激光扫描显微镜检测细胞凋亡的发生。
Annexin V-FITC Fluorescence
PI Fluorescence
Time course of apoptosis in TF-1 cells cultured in GM-CSF-free medium
Apoptotic HeLa cells were stained with FITC-AnnexinV+PI
流式细胞分析DNA
根据凋亡细胞DNA断裂和丢失，采用碘化丙啶使DNA
产生激发荧光，用流式细胞仪检出凋亡的亚二倍体细
胞，同时又能观察细胞的周期状态。
3. 线粒体膜势能（mt）的检测
线粒体荧光染料：Rhodamine 123、DiOC6（3）、JC-1、TMRM等对线粒体膜电位非常敏感，其荧光的增强或减弱说明线粒体内膜电负性的增高或降低。
线粒体跨膜电位的存在使亲脂性阳离子荧光染料可结合到线粒体基质，其荧光的增强或减弱说明线粒体内膜电负性的增高或降低。
Bcl-2家族与线粒体相关细胞凋亡
◆Bcl-2是一种原癌基因，是ced-9在哺乳类中的同源物，能抑制细胞凋亡（抑制凋亡蛋白酶的激活，直接抗氧化，抑制线粒体释放促凋亡蛋白质，抑制凋亡调节蛋白对细胞的毒作用）
◆与线粒体及内质网膜相结合；Bcl-2蛋白的羧基末端有一穿膜的结构域；Bcl-2家族成员的基因中，常常含有三个保守的Bcl-2同源区，即BH1，BH2和BH3
◆哺乳动物细胞中发现的Apaf2即是CytC
（B 细胞淋巴瘤/白血病-2，B cell lymphoma/leukemia-2）
分布：造血细胞，上皮细胞，淋巴细胞等多种瘤细胞
线粒体凋亡信号途径
Mitochondrial Pathway
4. DN***段化分析
细胞凋亡时主要生物化学特征是其染色质发生浓缩, 染色质DNA在核小体单位之间的连接处断裂, 形成180200bp整数倍的寡核苷酸片段, 在凝胶电泳上表现为梯形电泳图谱(DNA ladder)。
荧光素（fluorescein）标记的dUTP在脱氧核糖核苷酸末端转移酶（TdT Enzyme）的作用下，可以连接到凋亡细胞中断裂DNA的3’-OH末端，并与连接辣根过氧化酶（HRP，horse-radish peroxidase）的荧光素抗体特异性结合，后者又与HRP底物二氨基联苯***（DAB）反应产生很强的颜色反应（呈深棕色），特异准确地定位正在凋亡的细胞，因而在光学显微镜下即可观察凋亡细胞；由于正常的或正在增殖的细胞几乎没有DNA断裂，因而没有3‘-OH形成，很少能够被染色。
5. TUNEL（TdT-mediated dUTP nick end labeling ）
（TdT-mediated dUTP nick end labeling ）
◆Caspase家族
Caspase活性位点是半胱氨酸(Cysteine)，
裂解靶蛋白位点是天冬氨酸残基后的肽
键，因此称为Cysteine aspartic acic specific
protease，即Caspase
6. Caspase活性的检测
caspase 超家族成员及其相应底物
Caspase活化
Caspase自身以非活化的Procaspase存在，其激活依赖于其他的