文档介绍：实验四 微生物的显微直接计数
，掌握
血球计数板的计数方法。
2. 观察酵母菌的形态，学****区分酵母
菌死活细胞的方法。
一、目的要求
（一）血球计数板计数原理
血球计数板是一块特制实验四 微生物的显微直接计数
，掌握
血球计数板的计数方法。
2. 观察酵母菌的形态，学****区分酵母
菌死活细胞的方法。
一、目的要求
（一）血球计数板计数原理
血球计数板是一块特制的载玻片，有四条竖槽和一条横槽。横槽两边的平台上各有一个有九个大方格的方格网，中间大方格为计数室：边长为１ｍｍ，，(10-4ml)。计数室有两种规格：一是分为16个中方格，每中方格中有25个小方格；另一种是分为25个中方格，每中方格有16个小方格。两种都共有400个小方格。
二、基本原理
4-2
计数板结构
计数区
每一个大方格边长为 1mm，则每一大方格的面积为1mm2 ，盖上盖玻片后，， 。其计算方法如下：
1 ． 16 × 25 的计数板计算公式
细胞数/mL=(100 小格内的细胞数/ 100) × 400 × 1000 ×稀释倍数
2 ． 25 × 16 的计数板计算公式
细胞数/mL=(80 小格内的细胞数 /80) × 400 × 1000 ×稀释倍数
（二）区分酵母菌死活细胞基本原理
美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型是无色。
用美蓝对酵母菌的活细胞进行染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变成无色的还原型。
具有还原能力的酵母活细胞是无色的或淡蓝色，
而死细胞或代谢作用的衰老细胞则呈蓝色。
三、器材
酵母菌悬液、血球计数板、显微镜、
盖玻片、美蓝染液等。
1. 酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴别
(1) 在载玻片上加半滴美蓝染液，在染液上滴一滴菌液。取一块盖玻片，先将一边与菌液接触，然后慢慢将盖玻片放下盖在菌液上。
(2) 将标本片放3分钟后，先用低倍镜然后用高倍镜观察酵母菌的形态和出芽情况，并根据颜色来区别死活细胞。
四、操作步骤
（1）稀释
将酵母菌悬液进行适当稀释，菌液如不浓，可不必稀释。
（ 2）镜检计数室
在加样前，先对计数板的计数室进行镜检。若有污物，则需清洗后用电吹风吹干后 才能进行计数。
2. 酵母菌液的计数
（3）加样品 在血球计数板上盖上盖玻片, 用滴管将摇匀的酵母菌液由盖玻片边的小槽滴一小滴,菌液会自动进入计数室，静置5分钟。
（4 ）显微镜计数 将血球计数板置于载物台上，先用低倍镜找到计数室的位置，再换高倍镜计数。每计数室计5个中格（四角和中间）。计数原则：计上不计下，计左不计右。芽体占母细胞一半时算一个。 位于格线上的菌体一般只数上方和右边线上的。如遇酵母出芽，芽体大小达到母细胞的一半时，即作两个菌体计数。计数一个样品要从两个计数室中计得的值来计算样品的含菌量。
出芽菌计数
压线菌计数
（5 ）清洗血球计数板 使用完毕后，将血球计数板在水龙头上用水柱冲洗，切勿用硬物洗刷，洗完后自行晾干或用吹风机吹干。镜检，观察每小格内是否有残留菌体或其化沉淀物。若不干净，则必须重复洗涤至干净为止。
1、用此法计数的结果是活菌体还是死、活菌体的总和？
2、为什么用两种不同规格的计数板测同一样品时，其结果一样？
五、思考题及作业题
各个中格中菌数
A
B
菌数 /mL
二室平均值
1
2
3
4
5
第一室
第二室
注：A 表示五个中方格中的总菌数； B 表示菌液稀释倍数。
3、将结果记录于下表中。