文档介绍：蛋白的生物素标记操作指南
（Octet 分子互作仪器测定专用）
概述
链霉亲和素与生物素之间的相互作用是目前已知强度最高的非共价作用，并
且二者的结合稳定性好，专一性强，不受试剂浓度12) 1 mg，
加入 mL 的 DMSO 配置成 10 mM 母液
4) PD MiniTrap™ G-25 Desalting Column 用于脱盐，蛋白样品体积 - mL，
(GE, 货号：28-9180-07 )。
5) Zeba desalting spin columns 脱盐柱：
a) 蛋白样品体积 30-130 uL,使用 mL 脱盐柱(Thermo, 货号：89882)
b) 蛋白样品体积 200-700 uL,使用 2 mL 脱盐柱(Thermo, 货号：89889)
c) 蛋白样品体积 600-2000 uL,使用 5 mL 脱盐柱(Thermo, 货号： 89891)
6) 透析装置：Slide-A-Lyzer™ Dialysis Cassettes（Thermo，具体型号根据目标蛋
白样品体积以及目标蛋白的分子量进行选择。建议选择截留分子小于目标蛋
白分子量的 3 倍，如蛋白分子量为 90kDa，透析装置选择截留分子量选择小
于 30kDa）。
4,5,6 任选一，4,5 比较快，但是蛋白损失大。5 可能残留生物素去除不干净，
导致蛋白固化量不够。6 蛋白损失相对小，但是时间长。推荐 4 为首选。
7) 待生物素标记的目标蛋白（要求至少 10 ug，浓度大于 100 ug/mL）。
生物素标记注意事项
1. 如采用氨基偶联生物素化试剂，确保蛋白样品中(包括缓冲液)无载体蛋白（如
BSA），不得含有其他任何带有氨基的物质（如 Tris）
如果有，必须通过脱盐或者透析方式去除。
2. 如采用其他基团偶联生物素化试剂，样品中(包括缓冲液)除目标蛋白外不得
含有其他任何带有相同基团的的物质（如采用巯基生物素化试剂，则样品中
不得含有 DTT）。
23. 如果要生物素化比较小的物质，请注意脱盐柱或者透析袋的截留分子量。
比如生物素化一个 4KDa 的多肽，用 7KDa 的截留分子量的透析袋或者脱盐
柱就无法对生物素化试剂和多肽就行有效分离。
实验步骤
1. 准备生物素化试剂：将 NHS-PEG12-Biotin 配制成浓度为 10 mM 的母液。
2. 生物素化比例的选择：建议使用偶联生物素：蛋白的摩尔比(MCR)为 1: