文档介绍：油镜使用的原理
油浸接物镜。当光线由反光镜通过玻片与镜头之间的空气时，由于空气与玻片的密度不同，使光线受到曲折，发生散射，降低了视野的照明度。若中间的介质是一层油（其折射率与玻片的相近），则几乎不发生折射，增
实验原理 (continued)
细菌细胞微小，透明，不易观察，需染上颜色。利用单一染料对细菌进行染色，使经染色后的菌体与背景形成明显的色差，从而能更清楚地观察到其形态和结构。
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1、菌种
枯草芽孢杆菌1D培养物
2、染色剂
吕氏碱性美蓝染液
齐氏石碳酸复红染液
实验材料
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涂片
干燥
固定
染色
水洗
干燥
镜检
操作步骤
四、实验步骤
无菌操作
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菌悬液
涂片
干燥
滴加无菌水
固定
取菌苔
涂片
操作步骤（continued）
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1、涂片
取两块载玻片，各滴一小滴（或用接种环沾取）生理盐水（或无菌水）于玻片中央，用接种环以无菌操作分别从枯草杆菌和金黄色葡萄球菌斜面上挑取少许菌苔于水滴中，混合并涂成薄膜。
如用菌悬液或液体培养物，可用接种环挑取1-2环直接涂于载玻片上。
Notes: 1） 载玻片要洁净无油迹 2）滴生理盐水和取菌不宜过多 3）涂片要涂抹均匀，不宜过厚。
操作步骤（continued）
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3、固定
固定的目的：
1）使细胞质凝固，以固定细胞形态；
2）并使菌体牢固地附着在载玻片上。
固定方法：
热固定：涂面朝上，通过火焰数次
注意：温度不宜过高，以玻片背面不烫手为宜，
否则会改变甚至破坏细胞形态
操作步骤（continued）
2、干燥 室温自然干燥
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4、染色
◇ 将玻片平放于玻片搁架上，滴加染液于涂片上（染液刚好覆盖涂片薄膜为宜）。
◇ 美蓝染色1-2min；石碳酸复红染色约1min。
操作步骤（continued）
5、水洗
倒去染液，用洗瓶（内装自来水）轻轻冲洗，直至涂片上流下来的水无色为止；染色废液收集在废液缸中。
Note: 水洗时，不要直接冲洗涂面，而应使水从载玻片的一端流下，水流不宜过急，以免涂片薄膜脱落。
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7、镜检
细菌个体微小，一般使用油镜观察细菌个体形态。
操作步骤（continued）
6、干燥
自然干燥或用电吹风吹干，也可用吸水纸吸干。
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7、镜检（continued）
Notes:
必须等涂片完全干后才可滴加香柏油
油镜使用完毕，切记按规定步骤擦干净，否则可能损害镜头
3）擦油镜镜头方法：分三步 A）先用擦镜纸揩去镜头上的香柏油 B）从双层瓶的下层沾少许二甲苯滴在另一片擦镜纸上 ，擦拭镜头； C）再用一小片擦镜纸擦去镜头上可能残留的二甲苯。
操作步骤（continued）
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三 革兰氏染色
单染色法：只能观察微生物的大小、形状、和细胞排列状况，但不能鉴别微生物以及它的特殊构造等。
复染色法：用两种或两种以上染色液进行染色，有协助鉴别微生物的作用，故也称鉴别染色法。常用的有： 革兰氏染色法、抗酸染色法、芽孢染色法、荚膜染色法等。
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革兰氏染色（Gram stain）
1984年，丹麦医生Gram采用革兰氏染色法细菌细胞壁区分为两种类型：革兰氏阴性（G+）和革兰氏阳性（G-）
革兰氏染色步骤:
1）结晶紫初染；2）碘液媒染；
3）酒精脱色； 4）番红复染
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G﹢菌：细胞壁厚，肽聚糖网状分子形成一种透性屏障，当乙醇脱色时，肽聚糖脱水而孔障缩小，故保留结晶紫-碘复合物在细胞膜上。呈紫色。
Gˉ菌：肽聚糖层薄，交联松散，乙醇脱色不能使其结构收缩，其脂含量高,乙醇将脂溶解，缝隙加大，结晶紫-碘复合物溶出细胞壁，番红复染后呈红色。
革兰氏染色的实验原理
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细菌的特殊形态结构
芽孢：休眠体，不利环境下产生，耐受各种极端环境。
荚膜：多糖，包裹在菌体外围，保护菌体
鞭毛：运动，菌落形态。
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实验材料
大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌（2 day培养物）
革兰氏染色液一套
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实验步骤
革兰氏染色