抗Xa与抗IIa活性检测方法标准操作规程.docx

文档介绍：一、USP方法
抗IIa活性（~）
.1仪器：紫外可见分光光度计、低温循环槽、电子天平
.2试液：
醋酸溶液：取冰乙酸42ml于100ml容量瓶中，加水稀释至刻度，混匀。
。4个浓度溶液的活性对数值组合计算得到最终的几何平均值，同时计算可信限度。抗Xa因子用IU/mg表示，按干品计。%。
二、EP方法
抗FXa因子和抗FⅡa因子活性检测：（2人检测）
.
.
.***氨基甲烷的***化钠缓冲液(pH )：
溶解三羟******，加牛血清蛋白10g。用盐酸（取浓盐酸85 ml用蒸馏水稀释到1000 ml，以下所用盐酸无特殊要求外，指此浓度盐酸），用纯化水稀释到1000 ml。
. 三羟***氨基甲烷-EDTA缓冲液(pH )：
溶解******
。，用纯化水稀释到500 ml。
.：
.(N-α-苄氧基羰基-D-精氨酰基-L-甘氨酰基-L-精氨酸-4-硝基苯***的二氢***化物)：
显色底物S-2765：用水溶解显色底物成3mmol/L的溶液。临用前用三羟***氨基甲烷-EDTA缓冲液(pH )。
.(D-苯基丙氨酰基-pipecolyl-L-精氨酸-4-硝基苯***的二氢***化物水溶液)：
显色底物S-2238：用水溶解显色底物成3mmol/L的溶液。临用前用三羟***氨基甲烷-EDTA缓冲液(pH )。
.：
Xa因子溶液：取Xa因子1瓶，。
. Antithrombin(抗凝血酶)：
用三羟***氨基甲烷的***化钠缓冲液(pH )配制成含5IU/ml的溶液，在2~8℃下保存。
. Thrombin：，2~8℃下保存。
.Ⅲ R1参照标准品的制备：
用三羟***氨基甲烷的***化钠缓冲液(pH )配制成含1IU/ml的溶液。
.ⅢR2参照标准品的制备：
用三羟***氨基甲烷的***化钠缓冲液(pH )。
. 30%乙酸：
量取冰乙酸30ml于100ml容量瓶中，加水稀释至刻度，混匀即得。
.2. 抗FXa因子活性检测：（抗FXa因子活性90IU/mg～125IU/mg）
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低分子肝素（LMWH）+抗凝血酶（AT过量）低分子肝素·抗凝血酶的复合物（LMWH-AT）
低分子肝素·抗凝血酶复合物（LMWH-AT）+FXa (FXa过量) LMWH·AT·FXa +FXa(剩余)
显色底物R1（S-2765）肽（peptide）+PNA
PNA在405nm处有吸收特性。
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根据原标准液的抗Xa因子的浓度（104IU/安瓿），加超纯水1ml配成约含104IU/ml贮备液，、，分别记为S1、S2、S3和S4。
稀释方法：取104IU/，加纯化水稀释至刻度，。
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.：
首先估测样品的抗FXa因子含量（IU/mg），，分别记为T1、T2、T3和T4。
稀释方法：将样品稀释为50IU/ml，，加纯化水稀释至刻度，。
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.，T1、T2、T3和T4表示为检测样品，S1、S2、S3 和S4表示参照品，A01、