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核酸检测法.docx

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文档介绍

文档介绍:: .
核酸检测法1技术概念
核酸检测针对的是病毒DNA和RNA,乙肝、丙肝和艾滋病等临床疾病的病毒检测: .
核酸检测法1技术概念
核酸检测针对的是病毒DNA和RNA,乙肝、丙肝和艾滋病等临床疾病的病毒检测,主要检测血液中是否有病毒核酸,作为诊断机体有无病原体感染的依据。
2检测技术编辑HIV检测
HIV基因组由两条单链RNA组成,,在RNA5端有一帽结构(m7G5ppp5GmpNp),3端有poly(A)尾巴。HIV的主要基因结构和组合形式与其他反转录病毒相同,均由5末端长重复(longterminalrepeat,LTR)、结构蛋白编码区(gag)、蛋白酶编码区(pro)、具有多种酶活性的蛋白编码区(pol)、外膜蛋白(env)和3末端的长重复LTR区组成。
核酸提取均采用磁珠法。
1)磁珠提取的原理:
将磁珠上标记特异性吸附核酸的物质特异性吸附核酸,并通过磁分离技术将病毒核酸从裂解液中提取出来。
2)步骤:
裂解—吸附—洗涤—洗涤—洗涤—洗脱
3)优点:
a. 磁珠提取特异性高,受标本因素影响小,灵敏度高

4)缺点:
、并需要一定的仪器(半自动、全自动)。
b. 完全手工工作,工作量太大。
应用套式聚合酶链反应(nPCR)检测技术
根据HIV-(nesledpolymerasechainreaction,nPCR)引物。将外周血单个核细胞裂解液先用外侧引物扩增,其产物再经内侧引物扩增,直接走凝胶电泳判定结果。nPCR的敏感性。较常规PCR高100〜1000倍,^1HIV-1感染者外周血样中的HIV基因。
根据专业文献记载,用本法检测63名HIV-1感染者全为阳性,而61名健康人和可疑者均为阴性,后者经

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