核酸检测法.docx

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核酸检测法1技术概念
核酸检测针对的是病毒DNA和RNA，乙肝、丙肝和艾滋病等临床疾病的病毒检测: .
核酸检测法1技术概念
核酸检测针对的是病毒DNA和RNA，乙肝、丙肝和艾滋病等临床疾病的病毒检测，主要检测血液中是否有病毒核酸，作为诊断机体有无病原体感染的依据。
2检测技术编辑HIV检测
HIV基因组由两条单链RNA组成，，在RNA5端有一帽结构（m7G5ppp5GmpNp），3端有poly（A）尾巴。HIV的主要基因结构和组合形式与其他反转录病毒相同，均由5末端长重复（longterminalrepeat，LTR）、结构蛋白编码区（gag）、蛋白酶编码区（pro）、具有多种酶活性的蛋白编码区（pol）、外膜蛋白（env）和3末端的长重复LTR区组成。
核酸提取均采用磁珠法。
1）磁珠提取的原理:
将磁珠上标记特异性吸附核酸的物质特异性吸附核酸，并通过磁分离技术将病毒核酸从裂解液中提取出来。
2）步骤：
裂解—吸附—洗涤—洗涤—洗涤—洗脱
3）优点：
a. 磁珠提取特异性高，受标本因素影响小，灵敏度高

4）缺点：
、并需要一定的仪器（半自动、全自动）。
b. 完全手工工作，工作量太大。
应用套式聚合酶链反应（nPCR）检测技术
根据HIV-（nesledpolymerasechainreaction，nPCR）引物。将外周血单个核细胞裂解液先用外侧引物扩增，其产物再经内侧引物扩增，直接走凝胶电泳判定结果。nPCR的敏感性。较常规PCR高100〜1000倍，^1HIV-1感染者外周血样中的HIV基因。
根据专业文献记载，用本法检测63名HIV-1感染者全为阳性，而61名健康人和可疑者均为阴性，后者经