文档介绍：蛋白质的盐析（验证型）
一、实验目的
了解在工业化生产过程中使用（ NH） 2SO的情况，及（NH） 2SO使用时的注意事项。
二、实验原理
用高浓度中性盐使蛋白质从溶液中沉淀出来的方法称盐析。常用的中性盐有（NH） 2SO、NaC蛋白质的盐析（验证型）
一、实验目的
了解在工业化生产过程中使用（ NH） 2SO的情况，及（NH） 2SO使用时的注意事项。
二、实验原理
用高浓度中性盐使蛋白质从溶液中沉淀出来的方法称盐析。常用的中性盐有（NH） 2SO、NaCl等。高、浓度中性盐能使蛋白质
沉淀是因为它具有脱水性，能脱去蛋白质胶粒水膜，又有中和蛋白质胶粒外双电层电荷的作用。不同蛋白质盐析时所需盐浓度不同，
故调节盐浓度，可适当地将蛋白质分开。如球蛋白在半饱和硫酸镂溶液中沉淀，清蛋白在饱和硫酸镂溶液中沉淀，用盐析法沉淀的 蛋白质并未变性，用稀释的方法或透析的方法可使之复溶。
三、器材与试剂
1、发酵溶液
10%勺三***醋酸溶液
饱和（NH） 2SO溶液
4、（NH） 2SO粉末
四、实验步骤
取发酵溶液5ml,加饱和（NH） 2SO溶液1ml 2ml 3ml 4ml 5ml ,混匀，静止数分钟，即有白色沉淀析出，应为何物？过
滤至清，除去沉淀，滤液备用。取少量沉淀，加H2O看是否复溶？' । ; /■ ■
,加10%勺三***醋酸数滴，有白色沉淀产生，应为何物？然后在721分光光度计OD00下进行透光率的检测，
检测时必须在倒入比色皿以后 10秒内读取（为什么？）。（在进行检测时应注意将 721分光光度计调整到 OD00；在测量前应把机 器预热半小时左右。在检测时应注意有效的检测范围是T值15%Z上到70%Z下）。
另外，，加（NH） 2SO粉末，随加随搅拌，直至（NH） 2SO不能溶解为止，有白色沉淀产生，
应为何物？然后过滤至清，除去沉淀，过滤备用。
将（1） - （3）做的滤液中加10%三***醋酸数滴观察有无沉淀产生。找到没有沉淀的加饱和（ NH） 2SO溶液的点。然后
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在721分光光度计。贷。下进行透光率的检测。并且作出曲线。
对大量的发酵液进行处理，在滤液中加10%三***醋酸数滴观察有无沉淀产生。
盐析曲线的制作方法：如果要分离一种新的蛋白质和酶，没有文献数据可以借鉴，则应先确定沉淀该物质的硫酸镂饱和
度。具体操作方法如下：取已定量测定蛋白质或酶的活性与浓度的待分离样品溶液，冷至0c〜5C,调至该蛋白质稳定的 pH值,
分6〜10次分别加入不同量的硫酸镂，第一次加硫酸镂至蛋白质溶液刚开始出现沉淀时，记下所加硫酸镂的量，这是盐析曲线的
起点。继续加硫酸镂至溶液微微混浊时，静止一段时间，离心得到第一个沉淀级分，然后取上清再加至混浊， 离心得到第二个级分，
如此连续可得到 6〜10个级分，按照每次加入硫酸镂的量，查出相应的硫酸镂饱和度。将每一级分沉淀物分别溶解在一定体积的 适宜的pH缓冲液中，测定其蛋白质含量和酶活力。以每个级分的蛋白质含量和酶活力对硫酸镂饱和度作图，即可得到盐析曲线。
五、盐析注意事项：
.盐析的成败决定于溶液的pH值与离子强度，溶液pH值越接近蛋白的等电点，蛋白质越容易沉淀。
.盐析一般用的硫酸镂，容易吸潮，因而