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(1)提取液的制备
常用的提取剂有水和乙醇溶液,提取液的制备方法要根据样的性状而左,但应遵循以下匍萄糖标准溶液,直至溶液蓝色刚好图褪去为终点。记录消耗匍萄糖 标准溶液的总体积。平行操作3次,取其平均值。
F =c ・ V
式中:F 10mg碱性洒石酸铜溶液相当于葡萄糖的质量,mg;
C……窗萄糖标准溶液的浓度,mg/ml;
V 标定时消耗匍萄糖标准溶液的总体积,mb
③ 样品溶液预测
吸取碱性酒石酸铜甲液及乙液各5 mb置于250ml锥形瓶中,加水10ml,加玻璃珠3粒。 加热使苴在2分钟内沸腾,准确沸腾30秒钟,趁沸以先快后慢的速度从滴定管中滴加样品 液,须始终保持溶液的沸腾状态,待溶液蓝色变浅时,趁热以每2秒一滴的速度滴定,直至 溶液蓝色刚好褪去为终点。记录消耗溶液的体积。
④ 样品溶液测定
吸取碱性洒石酸铜甲液和乙液各5ml,置于250ml锥形瓶中,加水10ml,加玻璃珠3粒。 从滴左管加入比预测时样品溶液消耗总体枳少1ml的样品液,使其在2分钟内加热至沸, 准确沸腾30秒钟,趁热以每2秒一滴的速度继续滴左,直至蓝色刚好褪去为终点。记录消 耗样品液的体积。平行操作3次,取英平均值
⑸结果计算 F
还原糖(以葡萄糖汁%) v—ZZ
…_ m x x 1000
式中:m一…样品质量,g: 250
F……10ml碱性酒石酸铜溶液相当于葡萄糖的质量,mg:
V--…测定时平均消耗样品溶液的体积,ml:
250……样品溶液的总体积,ml。
(6) 说明与讨论
•①醋酸锌及亚铁氛化钾作为蛋白质沉淀剂这两种试剂混合形成白色的氣亚铁酸锌 沉淀,能使溶液中的蛋白质共同沉淀下来。
•②此法所用的氧化剂碱性洒石酸铜的氧化能力较强,醛糖和***糖都可被氧化,所以 测得的是总还原糖量。
•③本法是根据一左量的碱性洒石酸铜溶液(Cu2+量一泄)消耗的样液来汁算样液 中还原糖含量,反应体系中Cu2+的含量是泄量的基础,所以在样品处理时,不能 用铜盐作为澄淸剂,以免样液中引入Cu2+ ,得到错误的结果。
④ 次***蓝也是一种氧化剂,但在测泄条件下氧化能力比Cu2+弱,故还原糖先与Cu2 + 反应,Cu 2 +完全反应后,稍过量的还原糖才与次***蓝指示剂反应,使之由蓝色变为无 色,指示到达终点。
⑤ 为消除氧化亚铜沉淀对滴定终点观察的干扰,在碱性酒石酸铜乙液中加入少量亚铁氣化 钾,使之与Cu2O生成可溶性的无色络合物,而不再析出红色沉淀,苴反应如下:
Cu2O + K4Fe(CN) +H2O=K2Cu2Fe(CN)6 +2KOH
⑥ 碱性洒石酸铜甲液和乙液应分别贮存,用时才混合,否则洒石酸钾钠铜络合物长期在 碱性条件下会慢慢分解析岀氧化亚铜沉淀,使试剂有效浓度降低。
⑦ 滴宦必须在沸腾条件下进行
原因:一是可以加快还原糖与的反应速度;二是次***蓝变色反应是可逆的,还原型次*** 蓝遇空气中氧时又会被氧化为氧化型。此外,氧化亚铜也极不稳左,易被空气中氧所氧化。
保持反应液沸腾可防止空气进入,避免次***蓝和氧化亚铜被氧化而增加耗糖量。
⑦滴宦必须在沸腾条件下进行
原因:一是可以加