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中国生物电泳网 专业销售维修:各种 电泳槽/ 1000ml,高压灭菌。
ACD 抗凝剂:柠檬酸 柠檬酸钠 葡萄糖 ;最后加灭菌去
离子水至 350ml,高压灭菌。
提取缓冲液(Extractionbuffer):
10mMTrisCl(PH=)(PH=)(PH=)
EDTA(PH=)%SDS10%;最后加灭菌去离子水至 100ml,
高压灭菌
试验步骤:
1、在 500μl 抗凝血中加入 ligsisbuffer1000μl,充分颠混至清亮。以 4000rpm,
离心 5min。弃上清液。
2、沉淀中加入 ligsisbuffer1500μl,充分匀浆。以 6000rpm,离心 5min。
3、彻底弃去上清,加入 extractionbuffer500μl(裂解细胞),混匀置于 37
℃,水溶 1h。
4、加入 8μl 的蛋白酶 K,颠混,37℃过夜(或 55℃,3h,但是 37℃效果
要好些)。
5、每管加入 450μl 饱和酚(取溶液下层)缓慢摇晃 10min,以 5500rpm,
离心 15min。
6、取上清,每管加入 250μl 饱和酚和 250μl ***仿-异戊醇,摇匀 10min,
以 5500rpm,离心 15min。
7、取上清,每管加入 500μl ***仿-异戊醇,摇匀 10min,以 5500rpm,离
心 15min。
8、取上清,每管加 50μl 的 3M 的 NaAC+,适量无水乙醇(预冷)至满,
中国生物电泳网 专业销售维修:各种电泳槽/电泳仪/紫外仪等电
泳设备 http: 专业销售维修:各种电泳槽/电泳仪/紫外仪等电
泳设备 http:
摇匀放入-20℃保存 2h 以上。
9、以 12000rpm,离心 20min。去上清,加入 70%乙醇 500μl,以 12000rpm,
离心 5min,去上清,50-60℃干燥。
10、加入 50μl 灭菌去离子水,转弹,混匀。
四,NaI 提取法提取外周血白细胞基因组:
实验步骤:
1、取外周抗凝血( 全 血)100ul 于 eppendorf 管中,12000rpm 离心 12min。
2、弃上清,加双蒸水 200ul 溶解,摇匀 20s。
3、混匀后加 6MNaI 溶液 200ul,摇匀 20s。
4、加入***仿/异戊醇(24:1)400ul,边加边摇,摇匀 20s,12000rpm 离
心 12min。
5、取上层液 350ul,加入另一新 eppendorf 管中,加 倍体积异丙醇,
摇匀 20s,室温放置 15min,静置后的反应体系 15000rpm 离心 12min,使沉淀
紧贴 eppendorf 管壁。
6、弃异丙醇,加 70%乙醇 1ml(不振动),以 15000rpm 离心 12min。
7、弃乙醇,敞开 eppendorf 管盖,烘干(37℃恒温箱)后,加 1xTE 溶液
30ul,溶解 DNA