实验大肠杆菌的培养和分离演示文稿.ppt

文档介绍：实验大肠杆菌的培养和分离演示文稿
第一页，共三十九页。
实验大肠杆菌的培养和分离
第二页，共三十九页。
什么是培养基？
三角瓶
培养皿
试管
液体培养基：扩大培养，工业生产。
固体培养基：分离纯化，鉴定菌种，B液体培养基、50 mL LB固体培养基和培养皿进行高压蒸汽灭菌。
无菌水
培养皿用牛皮纸包扎
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Step2：倒平板
②在酒精灯火焰旁将三角瓶中的固体培养基（冷却到60℃）倒入灭菌的培养皿中，置于水平放置上，并轻轻晃动，待凝固后形成平面。
超净台
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Step3：接种后扩大培养
③将斜面上培养的大肠杆菌菌种接种到灭菌后的液体培养基中，使其在37℃摇床培养12 h 。
恒温摇床
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Step4：平板划线分离
④用接种环在培养大肠杆菌的三角瓶中蘸取菌液一次，在固体培养基的平板上连续划线。将培养皿倒置，放在37 ℃恒温箱中培养12～24 h。
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怎样在平板上划线？
1次
2次
3次
4次
连续划线法
分区划线法
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原因：随着划线次数的增加，菌数越来越少，最终在划线的末端出现由一个细菌繁殖而来的单个菌落。
为什么通过划线分离可得到单菌落？
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原因：既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基中造成污染。
恒温培养时培养皿倒置
培养皿倒置
皿盖
皿底
恒温培养箱
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Step5：菌种的斜面保存
⑤将接种环将单菌落取出，用划线法接种在斜面培养基上，37℃培养24 h后，置于4℃冰箱中保存。
斜面培养基
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试管斜面培养基的制作
方法：将未凝固的含有琼脂的培养基加入试管中，灭菌后将试管斜放，令其冷却，固体培养基即成为斜面。
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平板划线分离法
①灼烧接种环
外焰
先灼烧后冷却：以免接种环温度太高，杀死菌种。
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②接种环冷却后，蘸取带菌培养物
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③在近火焰处，让带菌接种环在固体培养  基上划线
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④恒温培养箱中倒置培养
分区划线法
每次划线之前都要灼烧接种环。
总是从上一次划线的末端开始划线。
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稀释涂布分离法
①用无菌吸管吸取1mL细菌培养液加入另一个盛有9mL无菌水的试管中，混合均匀，以此制成10-1倍的稀释液。
①梯度稀释菌液：10-5~10-7倍
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②滴加菌液
②，加在培养皿的固体培养基上。
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③用玻璃刮刀涂布
玻璃涂棒
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③将玻璃刮刀放在酒精灯火焰上灼烧，待玻璃刮刀冷却后，在酒精灯旁打开培养皿，将菌液涂布到整个培养基表面。
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④将培养皿倒置，在37℃恒温箱中培养24~48 h。
④恒温培养箱中培养
恒温培养箱
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结果：以每个培养皿中有20个以内的单菌落最为合适。
10-1
10-2
10-3
10-4
10-5
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倒平板
平板划线分离
练一练，识一识
稀释涂布分离
接种环
玻璃刮刀
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例题：要获得遗传特性单一的大肠杆菌菌种，一般必须对原有的大肠杆菌菌种进行扩大培养，并利用纯化技术得到单菌落的菌种。请回答下列有关大肠杆菌的培养和分离实验的相关问题：
（1）对买回来的大肠杆菌菌种进行扩大培养，一般用LB培养基，在培养基中为微生物提供碳源、氮源和能源的物质主要是　　　　　　　　　　，为调节渗透压，要加入一定量的　　　。为进行大肠杆菌的分离，还要加入 配制成固体培养基，并进行倒平板的操作。
蛋白胨和酵母提取物
***化钠
琼脂
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（2）获得纯净微生物培养物的关键是　　　　　　　，为此，必须对培养器皿、接种用具和培养基进行严格灭菌。培养器皿和培养基一般采用　　　　　 法灭菌，接种环采用灼烧法灭菌。同时在接种或倒平板操作时，除了在超净台上进行操作并对实验者的衣着、手和实验空间进行严格清洁和消毒外，还必须　　　　　　　　　　 以防止空气中的杂菌污染。
（3）大肠杆菌菌种的扩大培