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HIV核酸检测技术应用现状
HIV核酸检测技术应用现状 本文关键词：核酸，检测技术，现状，HIV
HIV核酸检测于艾滋病的早期诊断、监测抗病毒治疗效果及疾病进展。临床上常用的定量检测试剂包括美国罗氏分子诊断公司研发的ＲｏｃｈｅＣｏｂａｓＴａｑＭａｎｖ２．０和美国ＡｂｂｏｔｔＭｏｌｅｃｕｌａｒ公司生产的ＡｂｂｏｔｔＲｅａｌＴｉｍｅＨＩＶ－１检测试剂盒。其技术主要基于实时荧光定量ＰＣＲ〔ＱｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅＲｅａｌ－ｔｉｍｅＰＣＲ〕的方法对血清中ＨＩＶ核糖核酸／脱氧核糖核酸〔ＲＮＡ／ＤＮＡ〕进展定量分析，上述两种试剂盒主要应用了Ｔａｑｍａｎ水解探针法，自１９９６年美国ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ公司独创ＴａｑＭａｎ技术以来［１１］，该技术如今已经被广泛应用到ＨＩＶ基因检测［１２］。法国Ｂｉｏｍｅｒｉｅｕｘ公司生产的ＮｕｃｌｉＳＥＮＳＥａｓｙＱＨＩＶ－１ｖ２．０应用了分子信标技术，这种基于非水解探针的分子信标技术也是较常用的一种核酸检测方法，在检测ＨＩＶ－１病毒载量时与ＴａｑＭａｎ探针法具有较好的相关性和相同性［１３－１４］，但分子信标探针设计较为困难且本钱较高。实时荧光定量ＰＣＲ技术与常规的ＰＣＲ技术相比［１５］，特异性更高，不仅能够有效地解决ＰＣＲ过程的污染问题，而且具有自动化程度高等特点。目前实时荧光定量ＰＣＲ在市场上应用广泛，我国常用国内外的实时荧光定量ＰＣＲ试剂进展检测。深圳凯杰公司、广州达安公司等均已研发出ＨＩＶ核酸诊断试剂投入市场［１６］。美国ＳｉｅｍｅｎｓＨｅａｌｔｈｃａｒｅＤｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ公司基于分支链ＤＮＡ信号放大技术〔ｂｒａｎｃｈｅｄＤＮＡ，ｂＤＮＡ〕研发了ＶＥＲ－ＳＡＮＴＨＩＶ－１ＲＮＡｂＤＮＡ３．０检测试剂盒。ｂＤＮＡ技术于１９８９年由美国Ｃｈｉｒｏｎ公司研发［１７］，基于特别的分支链信号放大系统，靶标被捕获探针捕获后，与各级探针杂交，最终用与ｂＤＮＡ放大序列互补的碱性磷酸酶〔ＡＰ〕标记的寡核苷酸通过杂交与ｂＤＮＡ分子结合。通过对化学发光的强度的测定对靶标进展定量检测［１８］。由于反响过程不依靠于核酸扩增，因此不存在扩增产物的污染问题，这是该技术的一大优势，但如何提高检测的灵敏度是该技术的难点。同时该技术的缺陷在于信号放大探针在制备上难度较大且操作步骤过于繁琐，限制了其在临床检测中的应用。上述试剂所需的配套仪器本钱高、体积大，对操作人员的专业要求较高，适用于样本量较大的大型中心医院的检测。依据国内外的相关数据及文献报道，考虑到ＨＩＶ检测的特别性，幸免误诊，《全国艾滋病检测技术标准〔２０１５年修订版〕》中建议用５０００拷贝／ｍＬ作为判定结果的阈值，两次定量检测更有助于精确判定结果［１９］。对于评估抗病毒药物疗效和病程进展，同一病人宜运用一样试剂，有助于合理解读病毒载量的改变。
２基层卫生效劳机构的ＨＩＶ核酸检测
由于艾滋病困难的病程及其难治性，艾滋病患者到大医院诊治的时间相对来说较为短暂，其大局部的时间是在家庭、社区中度过的，ＨＩＶ的检测也应当尽可能地拓展到整个社会中去，以基层卫生效劳机构为核心开展ＨＩＶ感染者的社区检测，已成为燃眉之急的社区卫生效劳任务［２０］。基层医疗卫生效劳机构由于经费投入缺乏、医务人员水平有限，适合运用价格低廉、操作简便的一体化检测设备，从而降低核酸检测对试验室及操作人员的要求。设备的各个样本检测模块相互独立，可以实现样本的即到即检。《“十三五”深化医药卫生体制改革规划》中强调建立科学合理的分级诊疗制度，提升基层医疗卫生效劳实力［２１］。就ＨＩＶ检测而言，社区卫生效劳中心等基层医疗机构由于存在场地及人员限制，大多不能进展常规的核酸检测，而近年来全自动及集成化的ＨＩＶ核酸即时检测〔ｐｏｉｎｔｏｆｃａｒｅｔｅｓｔｉｎｇ，ＰＯＣＴ〕设备的开展，使得社区医院及资源匮乏地区的ＨＩＶ核酸检测成为可能。传统的ＰＣＲ试验一般都要进展样本的裂解、核酸提取、纯化及浓缩等繁杂的样品制备过程，消耗时间久［２２］。近几年市场上兴起的微流控芯片技术为实现ＨＩＶ核酸的即时检测供应了很好的开展方向。微流控芯片又称芯片试验室〔Ｌａｂｏｎａｃｈｉｐ，ＬＯＣ〕［２３］，是指在几平方厘米大小的芯片上构建生物或化学试验室。微流控技术具有所需样品体积小、检测效率高、运用本钱低且具有良好的兼容性、有望实现便携式检测装置等特点［２４－２５］。美国Ｃｅｐｈｅｉｄ公司开发了一款从样品中核酸的提取到完成ＰＣＲ检测完全实现自动化的ＧｅｎｅＸｐｅｒｔ微流控核酸检测系统，反响中大多数液体是以冻干的形式预先填充的，大大削减了样品混淆和操作错误的时机。从样本的制备到完成测试出检测结果仅须要半小时，减轻了操作者的工作