文档介绍：检验科结核杆菌核酸扩增荧光检测
检验科结核杆菌核酸扩增荧光检测
检验科结核杆菌核酸扩增荧光检测
结核杆菌核酸扩增荧光检测
1．
目的：保证 TB DNA检测结果正确、靠谱。
2．15000rpm 离心 5 分钟；
再重复清洗一次。（知液标本直用淋巴细胞分别液分别积淀）积淀直接
加 50ulDNA 提取液充足混匀 ,( 提取液内含不溶于水的物质 , 取样时需用加样器充足混匀后汲取。如出现因吸头嘴部太细不可以汲取或取样后拥塞吸头的现象，可先用干净无污染的剪刀将吸头嘴部剪去一截。 ) 开水浴
10 分钟（偏差不超出 1 分钟），转至 4℃静置 6-8 小时以保证充足裂解。10，000rpm 离心 5 分钟，取上清液 2ul 做 PCR反响。另取阴阳性质控标准品各 40ul 加等量 DNA提取液打匀，开水浴 10 分钟后同上办理。
扩增及 DA-620 仪器荧光检测操作
取单管人份 PCR 反响管一管，直接加入办理后样品或阴阳性质控品
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2ul

，6000rpm

离心数秒。将各反响管放入

PCR仪，按以下条件扩增：
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93℃

2

分钟预变性

, 而后按

93℃45

秒

55 ℃ 120

秒,

反响

10 个循环
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后置

33℃保温

, 快速逐一将反响管放入荧光检测仪

, 读取并记录读当数
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A0 。荧光激发波长为 487nm，检测波长为 525nm。最后按 93℃ 45 秒 55 ℃ 120 秒，共做 30 个循环后置 33℃保温。使用 PE9600，9700，2400 仪器
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循环参数为 93℃ 30 秒 55 ℃60 秒，其余仪器循环参数为 93℃ 45 秒
55℃ 120 秒。
PCR反响后荧光检测，待各 PCR管充足冷却至 33℃后，快速逐一将
扩增后的反响管放入荧光检测仪，读取并记录读数 A1。荧光激发波长为
487nm，检测波长为 525nm。
ABI GeneAmp5700 操作
将各后应管放入 PCR仪器的孔反响槽内，按对应次序设置阴阳性质
控标准品以及未知标本，并设置样品名称、标志荧光基团类和循环条件：
ABI GeneAmp5700 的循环条件： 93℃ 2 分钟预变性，而后按 9