文档介绍：复合酶法降低烟草薄片刺激性的研究
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试验方法
蛋白酶与果胶酶同时酶解正交试验 选择蛋白酶用量（200、300、400 U/g）、果胶酶用量（300、400、500 U/g）和酶解时间（2、3、4 h）进行正交试验，考察提取率和感官评吸得分。
3种不同的酶解方式 （1）果胶酶、蛋白酶同时酶解（PP）：取一定量烟末于锥形瓶中，按照料液比 1 ∶10 加入一定量去离子水，蛋白酶用量为 300 U/g，果胶酶用量为400 U/g，50 ℃酶解2 h，取出后在90 ℃水浴锅中加热15 min灭酶，取出后用流水冷却，以5 000 r/min离心3 min。（2）先用蛋白酶处理，后用果胶酶处理（PrE-PE处理）：用1 mol/，加入200 U/g的蛋白酶，50 ℃酶解3 h后取出，在90 ℃水浴锅中加热 15 min 灭酶。冷却后用1 mol/L***，加入400 U/g果胶酶，50 ℃酶解时间为3 h，取出后于90 ℃水浴中加热15 min灭酶，以 5 000 r/min 离心3 min。（3）先用果胶酶处理，后用蛋白酶处理（PE-PrE处理）：先用400 U/g果胶酶于50 ℃水浴中酶解3 h，之后90 ℃水浴下灭酶 15 min，冷却后用 1 mol/L ，加入200 U/g蛋白酶，50 ℃酶解3 h，然后在 90 ℃ 水浴中加热 15 min 灭酶，以5 000 r/min离心3 min。 比较相关指标性质时，空白样品采用工业生产时的萃取条件，萃取结束后取出，于90 ℃水浴中加热15 min，以5 000 r/min离心3 min。
酶解制备涂布液的涂布与单料烟制备 将不同酶解处理的酶解液浓缩至固形物含量40%左右，稀释至一定体积，以35%的涂布率喷涂于片基，50 ℃烘干。所得薄片于22 ℃、相对湿度为60%条件下平衡48 h后，用打烟器将其卷制为每支质量为 g 的薄片单料烟。然后放置于22 ℃、相对湿度为60%的条件下平衡。
酶解涂布液单料烟的感官评吸 参照 YC/T 498—2014《再造烟叶（造纸法）感官评价方法》进行感官评吸，评价项目有香气质、香气量、混浊、烟气浓度、细腻度、木质气、其他杂气、刺激、灼烧、纯净度、舒适度、干燥感等。请10位专家级评价员对每项感官指标进行打分，，每项满分为10分，总分为120分。
涂布液中中性香气成分的鉴定 香气成分的提取采用同时蒸馏萃取法。取40 mL浓缩涂布液至1 000 mL圆底烧瓶中，加入350 mL水和90 g***化钠，接于同时蒸馏萃取一端，下装电热套加热。取40 mL二***甲烷于100 mL圆底烧瓶，放入60 ℃水浴锅中加热。调整电热套加热功率，使得二***甲烷开始回流时，样品溶液恰好开始沸腾，并迅速达到平衡，使分界面保持在“U”形管一侧中央位置。加热2 h后自然冷却，收集二***甲烷萃取液。用吸管吸取部分上层水，加入无水硫酸钠过夜存放12 h。将萃取液转移至烧瓶，加入30 μL浓度为 mg/mL 的乙酸苯乙酯溶液作为内标，在50 ℃浓缩至1 mL，有机滤膜过滤后进行气相色谱-质谱联用（GC-MS）分析。GC-MS分析条件参考文献[7]。
烟草薄片单料烟烟气常规成分的测定 按照GB/T 19609—2004《卷烟 用常规分析用吸烟机测定 总粒相物和焦油》、YC/T 30—1996《卷烟 烟气气相中一氧化碳的测定非散射红外法》、YC/T 156—2001《卷烟 总粒相物中烟碱的测定气相色谱法》等测定烟草薄片单料烟烟气常规成分。
煙草薄片热失重行为 分析采用热重分析仪测定薄片的热失重行为。升温速率为20 ℃/min，加热范围为20～900 ℃，以氮气、氧气体积比为 9 ∶1 进行裂解，混合气体流速为100 mL/min。
2 结果与分析
复合酶解正交试验结果
选择果胶酶用量、蛋白酶用量、酶解时间等3个因素进行优