文档介绍：肝糖原的提取、鉴定和定量
一、实验目的
掌握组织样品的制备方法，了解其注意事项。
了解肝糖原提取、糖原和葡萄糖鉴定和蒽***比色测定糖原含量的原理和注意事项，掌握其操作方法。
正确操作使用刻度吸管和可×2），分光光度计，精度为 10mg 级电子天平（ ×1）
剪刀（ ×1），镊子（ ×1），研钵（ ×1）
试管架（ ×1），（100×15）mm 试管（ ×3）
刻度吸量管（ 2mL×1， 5 mL×2）， 1000μL微量可调取液器（ ×1）
100mL 容量瓶（ ×1）
白瓷反应板（ ×1）
（二）实验样品和试剂
鸡肝。
95％乙醇。
(5％)三***醋酸溶液。
NaCl 溶液。
12mol/L HCl 。
(50 ％ )NaOH。
碘试剂。
班氏试剂。
(30％ )KOH 溶液。
标准葡萄糖液 (50mg/L) 。
17mol/L(90 ％ )H2SO4(用于制备蒽***显色剂）。
蒽***显色剂：称取蒽*** ，用 17mol/L H 2SO4 溶解至 100 mL。此试剂不稳定，以当日配制为宜，冰箱保存可用 4-5d。
实验方法：
吸取 1mL 量溶液时使用可调微量取液器，吸取 1mL 以上量溶液时使用刻度吸量管。（一）肝糖原的提取和鉴定
操作流程如下：
鸡肝约，剪碎
＋5%CCl 3COOH 1 ml
研磨至乳状
＋5%CCl 3COOH 3 ml
研磨成肝匀浆
全部转入离心管中，离心 3 分钟（ 4000 r / min）
沉淀（弃去）上清（取 2 ml）
2ml 95%乙醇，混匀，静置 10 分钟离心 5 分钟（ 4000 r / min）
上清（弃去）沉淀
＋蒸镏水 1 ml
沸水浴 2 分钟，溶解沉淀
白瓷板孔穴中

糖原溶液

1ml
＋浓

HCl 5

滴
加碘试剂糖原溶液

2 滴
2 滴

加碘试剂

2 滴

沸水浴

15 分钟，冷却
＋50%NaOH 5 滴
呈色对比

糖原水解液 2 滴

糖原水解液
＋班氏试剂

4 滴
混匀
沸水浴 2 分钟，观察变化
注意事项
1. 肝糖原提取一步，向上清液中加入 95％乙醇后，务必注意混匀。由于上清液为
水溶液，比重大于 95％乙醇，溶液分成两层。总量相对较多，混匀操作比较困难，最好