几种真菌DNA提取方法的比较.pdf

文档介绍：中国农学通报 2009,25(08):62-64
Chinese Agricultural Science Bulletin
几种真菌DNA提取方法的比较
广泛使用。 板上挑菌饼到液体 PDA 培养基中，28 ℃ 180 r/min 震
要进行 DNA 序列分析，就需要用 PCR 扩增特定的 荡培养5~7天，真空抽滤，收集干燥的菌丝。
DNA 片段，而 DNA 提取则是这项工作的基础。因此 主要试剂
找出一种快速且得率高的方法就显得很重要。笔者通 2×Taq PCR MasterMix 和蛋白酶 K 购于上海天根
过几种DNA提取方法的比较[2-3]，得到一种较好的提取 生物公司，CTAB，SDS，DNA-marker、GoldView购于上
真菌DNA的方法。 海生工生物公司，引物1（ITS1：5'-TCCGTAGGTGAAC
1 材料和方法 CTGCGG-3'）和引物2（ITS4：5'-TCCTCCGCTTATTGA
菌株来源 TATGC-3'）由上海英骏生物技术有限公司合成。
该研究所使用的菌株是由海南大学农学院提供
第一作者简介：吴发红，女，1982 年出生，安徽省池州市人，研究生。研究方向：分子生物学。通信地址：571737 海南大学（儋州校区）农学院，E-mail：
fafa-******@。
通讯作者：黄东益，男，1969 年出生，云南宣威人，教授，研究方向：水稻、甘蔗等作物的分子标记育种与分子细胞遗传学，微生物学。通信地址：
571737 海南大学（儋州校区）农学院，E-mail: ******@
收稿日期：2009-02-18，修回日期：2009-3-3。· ·
吴发红等：几种真菌DNA提取方法的比较 63
DNA提取方法 13000 r/min 离心 10 min；取上清，加 10 mg/ml 的 RNA
CTAB法： 酶，37 ℃水浴过夜处理；加入 800 μl 氯仿/异戊醇，摇
参照 Guo 等[4（] 2000）和 Saghai 等[5]的方法。取少 匀，13000 r/min 离心 10 min；取