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文档介绍

文档介绍:中国农学通报 2009,25(08):62-64
Chinese Agricultural Science Bulletin
几种真菌DNA提取方法的比较
广泛使用。 板上挑菌饼到液体 PDA 培养基中,28 ℃ 180 r/min 震
要进行 DNA 序列分析,就需要用 PCR 扩增特定的 荡培养5~7天,真空抽滤,收集干燥的菌丝。
DNA 片段,而 DNA 提取则是这项工作的基础。因此 主要试剂
找出一种快速且得率高的方法就显得很重要。笔者通 2×Taq PCR MasterMix 和蛋白酶 K 购于上海天根
过几种DNA提取方法的比较[2-3],得到一种较好的提取 生物公司,CTAB,SDS,DNA-marker、GoldView购于上
真菌DNA的方法。 海生工生物公司,引物1(ITS1:5'-TCCGTAGGTGAAC
1 材料和方法 CTGCGG-3')和引物2(ITS4:5'-TCCTCCGCTTATTGA
菌株来源 TATGC-3')由上海英骏生物技术有限公司合成。
该研究所使用的菌株是由海南大学农学院提供
第一作者简介:吴发红,女,1982 年出生,安徽省池州市人,研究生。研究方向:分子生物学。通信地址:571737 海南大学(儋州校区)农学院,E-mail:
fafa-******@。
通讯作者:黄东益,男,1969 年出生,云南宣威人,教授,研究方向:水稻、甘蔗等作物的分子标记育种与分子细胞遗传学,微生物学。通信地址:
571737 海南大学(儋州校区)农学院,E-mail: ******@
收稿日期:2009-02-18,修回日期:2009-3-3。· ·
吴发红等:几种真菌DNA提取方法的比较 63
DNA提取方法 13000 r/min 离心 10 min;取上清,加 10 mg/ml 的 RNA
CTAB法: 酶,37 ℃水浴过夜处理;加入 800 μl 氯仿/异戊醇,摇
参照 Guo 等[4(] 2000)和 Saghai 等[5]的方法。取少 匀,13000 r/min 离心 10 min;取