文档介绍：输血相关传染病检测技术概述
输血相关传染病种类
病毒性肝炎 乙、丙、丁、庚型肝炎
艾滋病
梅毒
巨细胞病毒
EBV感染
HTLV感染（美国、欧盟及我国的厦门血站开展）
疟疾
弓形体病等
输血相关传染病检测方法
酶联59; disappears Day 120
Infection
120
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
110
Infection Day 0
HBV DNA Variable, up to 31 days prior to HBsAg by ID NAT( 9-11 days by MP NAT)
HBsAg Day 59; disappears Day 120
HBV DNA
Anti-HBc
Infection
HBsAg
ALT
2 乙型肝炎病原体检测
病毒直接标志物
病毒抗原：
HBsAg、HBeAg、Pre-S1、Pre-S2
病毒核酸：
HBV DNA
间接性标志物
抗病毒抗体：
HBsAb、HBeAb、HBcAb
HBsAg 阳性表示HBV 感染;抗-HBs 为保护性抗体;HBeAg阳性可作为HBV 复制和传染性高的指标;抗-HBe 阳性表示HBV 复制水平低(但有前C 区突变者例外) ;抗-HBc 总抗体主要是抗-HBc IgG,只要感染过HBV ,无论病毒是否被清除,此抗体均为阳性;抗-HBc IgM 阳性提示HBV 复制,多见于乙型肝炎急性期。
近些年有许多实验室开展了乙肝前S1 抗原检测,前S1 抗原在病毒感染、装配、复制和刺激机体产生免疫反应等方面起着十分重要的作用,被认为是比HBeAg 更敏感的病毒复制标志,尤其适合无条件开展HBV DNA 检测的医疗单位。
微粒子酶免分析法(MEIA) 及化学发光法虽然灵敏度更高, ,但由于价格昂贵并未能广泛开展。
HBV 血清学标志物检测技术的发展趋势是从定性检测转变为定量分析。
HBV 血清学标志传统上包括HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe、抗-HBc 和抗-HBc Ig M。
HBV DNA 及其基因型、变异和cccDNA 的检测1
HBV DNA 检测
HBV DNA 定性和定量检测反映了病毒复制情况或水平,主要用于慢性HBV 感染的诊断、血清HBV DNA 水平的监测,以及评价抗病毒疗效,多使用各种PCR 技术。
基因型和变异的检测
HBV 病毒可分为8 型,分别为A、B、C、D、E、F、G、H。HBV 基因分型常用的方法有:多重PCR 法;限制性片段长度多态性分析法;线性探针反向杂交法;全基因序列测定法等。全基因序列测序分型的结果准确性高,尤其是能发现两种不同基因型的重组体感染,被公认为HBV 基因分型的金标准,但比较昂贵繁琐,不适合常规应用。
目前的研发趋势是针对有重要临床意义的HBV 变异进行快速、定量的多位点联合检测。
HBV DNA 及其基因型、变异和cccDNA 的检测2
cccDNA（共价闭合DNA[covalent closed circular]） 的检测
cccDNA 是HBV 的原始复制模板,对乙肝病毒的复制及感染状态的建立具有十分重要的意义。Southern blot 是检测HBV cccDNA 的经典方法,但是该方法过程比较复杂,而且灵敏度不高。实时荧光定量PCR 不需对PCR 反应产物进行开盖检测,从而减少了PCR 产物污染的可能 ,可对cccDNA 进行定量分析,多被实验室采用。
乙肝病毒微生物学检查法
HBV感染宿主的免疫学监测
HBV 感染的病程很大程度上取决于宿主的免疫机能,不同病程时期的机体免疫特点、体内病毒水平和肝脏损伤程度均不相同,临床免疫学检测对HBV 感染的各病程阶段的免疫状态判断、指导治疗和评价疗效等方面都有重要的意义。
流式细胞仪可以同时准确检测几种T淋巴细胞亚群的数量,监控病人的免疫状态,被实验室广泛应用。
3 乙肝诊断试剂的研制进展
抗-HBs诊断血清
血凝试验 反向被动血凝试验 RPHA
被动血凝试验PHA
放射免疫试验RIA
酶联免疫测定法（ELISA）试剂
DNA聚合酶链反应PCR
HBsAg全血金标检测试纸条
4 检测乙肝时常见问题1
阳性漏检的问题
一步法试剂的钩端效应，后带现象。试剂的标准中对一步法试剂有3份1：64效价的HBsAg阳性血清，检测结果要求为阳性。
灵敏度：灵敏度对于早期检出有利。
窗口期：
美国研究表明90%的HBsAg漏检是因为窗口期。
国内研究表明30%－40%是因为窗口期。
亚型问题
ad型检出率要高于ay型
变异