文档介绍:摘要:
微生物的检测, 无论在理论研究还是在生产实践中都具有重要的意
义,本文分生长量测定法,微生物计数法,生理指标法和商业化快速微
生物检测简要介绍了利用微生物重量,体积,大小,生理代物等指标的
二十余种常用的检测方法,简要介绍了以更方便的在显微镜下进展活菌计
数。如酵母活细胞计数可用美蓝染色液,染色后在显微镜下观察,活细
胞为无色,而死细胞为蓝色。
比例计数法:
将颗粒 〔如霉菌孢子或红细胞〕浓度的液体与一待测细胞浓度的菌
液按一定比例均匀混合, 在显微镜视野中数出各自的数目, 即可得未知
菌液的细胞浓度。 这种计数方法比拟粗放。并且需要配制颗粒浓度的悬
液做标准。
液体稀释法:
对未知菌样做连续十倍系列稀释, 根据估计数,从最适宜的三个连
续的 10倍稀释液中各取 5 毫升试样,接种 1 毫升到 3组共 15只装培养
液的试管中, 经培养后记录每个稀释度出现生长的试管数, 然后查最大
或然数表MPN〔most probably number〕得出菌样的含菌数,根据样品
稀释倍数计算出活菌含量。该法常用于食品中微生物的检测, 例如饮用
水和牛奶的微生物限量检查。
平板菌落计数法:
这是一种最常用的活菌计数法。将待测菌液进展梯度稀释,取一定
体积的稀释菌液与适宜的固体培养基在凝固前均匀混合, 或将菌液涂布
于已凝固的固体培养基平板上。保温培养后, 用平板上出现的菌落数乘
以菌液稀释度, 即可算出原菌液的含菌数。 一般以直径 9cm 的平板上出
现 50-500个菌落为宜。 但方法比拟麻烦, 操作者需有熟练的技术。 平板
菌落计数法不仅可以得出菌液中活菌的含菌数, 而且同时将菌液中的细
菌进展了一次别离培养,获得了单克隆。
试剂纸法:
在平板计数法的根底上,开展了小型商品化产品以供快速计数用。
形式有小型厚滤纸片, 琼脂片等。 在滤纸和琼脂片中吸有适宜的培养基,
其中参加活性指示剂 2, 3, 5-***化三苯基四氮唑〔 TTC ,无色〕待蘸取
测试菌液后置密封包装袋中培养。 短期培养后在滤纸上出现一定密度的
玫瑰色微小菌落与标准纸色板上图谱比拟即可估算出样品的含菌量。 试
剂纸法计数快捷准确,相比而言防止了平板计数法的人为操作误差。
膜过滤法:
用特殊的滤膜过滤一定体积的含菌样品, 经丫叮橙染色, 在紫外显
微镜下观察细胞的荧光, 活细胞会发橙色荧光,而死细胞那么发绿色荧
光。
生理指标法:
微生物的生长伴随着一系列生理指标发生变化,例如酸碱度, 发酵
液中的含氮量,含糖量,产气量等,与生长量相平行的生理指标很多,
它们可作为生长测定的相对值。测定含氮量:
大多数细菌的含氮量为干重的 %,酵母为 %,霉菌为 %。
根据含氮量x 。含氮量的测定方法有很多,
如用硫酸,过***酸,碘酸,磷酸等消化法和 Dumas 测 N2 气法。 Dumas
测 N2 气法是将样品与 CuO 混合,在 CO2 气流中加热后产生氮气,收
集在呼吸计中,用 KOH 吸去 CO2 后即可测出 N2 的量。
测定含碳量:
将少量〔- m@生物材料混入1毫升水或无机缓冲液中,
用 2 毫升 2%的 K2Cr2O7 溶液在 100