文档介绍：实验免疫学
王鹏辉 检验0903 3091502076
谈下炎症与疾病之间的关系
炎症反应是机体对抗疾病时的外在表现，在疾病的发展过程中，疾病处于不同的时期，炎症表现也是不尽相同的，可以对疾病的严重程度、预后情态反应；CRP（C-反应蛋白）浓度上升是各种原因引起的炎症反应的极为敏感的指标，有助于急性炎症、慢性炎症的鉴别诊断，从而制定相应的治疗方案；TREM-1（髓系细胞触发受体-1）是一个较好的预警指标，与疾病的严重程度具有较好的相关性，可用于评价疗效和估计预后。
总之，疾病的发展与炎症反应过程是相互影响的，疾病的发展会对炎症过程产生影响，而炎症反应的过程反过来也会影响疾病的发展。疾病发展早期多以变质、渗出性炎症反应为主，造成机体的损伤，而疾病发展的晚期多以增生为主，有利于机体损伤的修复。过分的炎症反应会加重疾病对机体的损伤程度，甚至使机体器官功能丧失；适当的炎性反应是机体对疾病的正常防御过程，通过适当的炎症反应，有助于清除疾病，修复疾病过程中对机体造成的损伤。
Lps刺激iDC后，会发生一系列的生物学改变：如表型改变，细胞因子分泌谱的改变，请设计两种方法检测IL-12表达水平
一、方法设计背景：IL-12是诱导Th1类免疫反应的主要细胞因子，能促进T细胞增殖，尤其作用于初始CD4+T细胞，促进其分化和增殖，也可显著提高NK细胞和T细胞产生IFN-γ的能力，故可以通过检测NK细胞活性，IFN-γ活性测定，淋巴细胞增殖的检测间接地反应IL-12的水平。
①NK细胞活性测定：以MTT比色法测定NK细胞活性
②IFN-γ活性测定：制备PHA激活的人淋巴母细胞；在96孔培养板上分别加入待测样品100μl，每组设3个复孔。培养48h收集上清，ELISA检测IFN-γ的产生含量。
③淋巴细胞增殖检测：制备PHA激活的人淋巴母细胞；PBS洗涤细胞，加入CFSE（5μmol/L）37℃孵育10分钟；细胞洗涤后调浓度为2*104/mL，加细胞50μL/孔于培养皿，并加入50μL待测样品，37℃50mL/LCO2培养72h，设3复孔。收集细胞，1500r/min 5min，弃去上清加1mLPBS洗涤两次，加200μL20g/L多聚甲醛固定液重悬细胞；FCM检测一羧基荧光素乙酰乙酸琥珀酰亚***脂（CFSE），通过计算机获取数据，以增殖指数（PI）表示，PI=增殖后细胞总数/增殖前细胞总数。
二、方法设计背景：IL-12是一种糖蛋白（N-糖酰基异二聚体），由分子量为35KDa和40KDa的两个亚单位组成的异二聚体，本法采用双抗体法测定标本中IL-12水平。用纯化的IL-12抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中一次加入IL-12，再与HRP标记的IL-12抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转为蓝色，并在酸的作用下转化为最终的黄色。颜色的深浅和样品中的IL-12呈正相关。用分光光度计在450nm波长下测定吸光度值（OD值），通过标准曲线计算样品中IL-12浓度。（酶联免疫吸附试验）
操作步骤：
标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在这10孔中分别加标准品稀释液50μl，在第一、第二孔中分别加标准品100μl，混匀；然后从第一、第二孔中各