文档介绍：实验十一 蛋白质脱盐
(透析和凝胶过滤)
在蛋白质的研究中，经常要进行蛋白质脱盐，即将蛋白质同其它盐类小分子分离开。蛋白质脱盐的方法很多，各有优缺点。以下仅介绍常用的透析和凝胶过滤方法，可根据实验条件和要求选用。
（一）蛋白质透析实验十一 蛋白质脱盐
(透析和凝胶过滤)
在蛋白质的研究中，经常要进行蛋白质脱盐，即将蛋白质同其它盐类小分子分离开。蛋白质脱盐的方法很多，各有优缺点。以下仅介绍常用的透析和凝胶过滤方法，可根据实验条件和要求选用。
（一）蛋白质透析
目的
学****透析的基本原理和操作。
原理
蛋白质是大分子物质，不能透过透析膜而小分子物质可以自由透过。在分离提纯蛋白质的过程中，常利用透析的方法使蛋白质与其中夹杂的小分子物质分开。
仪器、试剂、材料
仪器
烧杯；玻棒；离心机；离心管；冰箱；电炉。
试剂
1％***化钡溶液；硫酸铵粉末；1mol/L EDTA；2%NaHCO3。
材料
透析管（，长12－15cm）或玻璃纸;皮筋；鸡蛋清溶液：将新鲜鸡蛋的蛋清与水按1：20混匀，然后用六层纱布过滤。
操作方法
透析管（前）处理：先将一适当大小和长度的透析管放在1mol/L EDTA溶液中，煮沸10分钟，再在2％ NaHCO3溶液中煮沸10分钟，然后再在蒸馏水中煮沸10分钟即可。
取5ml蛋白质溶液于离心管中，加4g硫酸铵粉末，搅拌使之溶解。然后在4℃下静置20分钟，出现絮状沉淀。
离心：将上述絮状沉淀液以1000转/分的速度离心20分钟。
装透析管：离心后倒掉上清夜，加5ml蒸馏水溶解沉淀物，然后小心倒入透析管中，扎紧上口。
将装好的透析管放入盛有蒸馏水的烧杯中，进行透析，并不断搅拌。
每隔适当时间（5－10分钟），用***化钡滴入烧杯的蒸馏水中，观察是否有沉淀现象。
结果处理
记录并解释实验现象。
注意事项
1. 硫酸铵盐一定要充分溶解，才能使蛋白质沉淀下来。
思考题
在透析袋处理过程中， EDTA和NaHCO3起何作用？
（二）凝胶过滤
目的
学****凝胶过滤的基本操作技术，了解凝胶过滤脱盐的原理和应用。
原理
凝胶过滤的主要装置是填充有凝胶颗粒的层析柱。目前使用较多的凝胶有葡聚糖凝胶（Sephadex）、琼脂糖凝胶（Sepharose）和聚丙烯酰***凝胶（Bio-gel-P）等。这些多聚高分子材料,通过适当浓度的交联剂作用即产生分子间横向的交联，形成具有一定孔径的网络结构。当用这类材料制成粒状凝胶颗粒后，颗粒内部就形成一种三维网状结构。这些凝胶材料是高度亲水的，在水溶液里吸水显著膨胀。实际工作中常用每克干胶吸水量（ml）的10倍（G值）表示凝胶的交联度，可根据被分离物质分子的大小和工作目的，选择适合的凝胶型号。
当在柱顶加上分子大小不同的混合物并用洗脱液洗脱时，自由通透的小分子可以进入胶粒内部，而受排阻的大分子不能进入胶粒内部。二者在洗脱过程中走过的路程差别较大，大分子只能沿着胶粒之间的间隙向下流动，所经路程短，最先流出。而渗入胶粒内部的小分子受迷宫效应影响，要经过层层扩散向下流动，所经路程长，最后流出。通透性居中的分子则后于大分子而先于小分子流出。从而按由大到小的顺序实现大小分子分离。
凝胶过滤的操作条件温和，适于分离不稳定的化合物；凝胶颗粒不带电荷，不与被