文档介绍：实验一 MS培养基的配制
一、实验目的
了解植物外植体离体培养所需各种营养成分及激素种类.
初步掌握培养基母液配制方法.
二、实验原理
植物材料培养要获得成功,并正常生长,培养基的成分是一个决定性因素,实验一 MS培养基的配制
一、实验目的
了解植物外植体离体培养所需各种营养成分及激素种类.
初步掌握培养基母液配制方法.
二、实验原理
植物材料培养要获得成功,并正常生长,培养基的成分是一个决定性因素,不同植物要求不同的培养基.
大多数植物组织培养所用的培养基由无机营养物、碳源、维生素、生长调节物质和有机附加物等五类物质组成.
在配制培养基之前,为了使用方便、简化操作、用量准确,减少每次配药称量各种化学成分所花费的时间和误差,常常将配制培养基所需无机大量元素、微量元素、铁盐、有机物、激素成分分别配制成比需要量大若干倍的浓缩母液,置于冰箱内保存.
当配制培养基时,按预先计算好的量分别吸取各种母液稀释即可.
三、实验材料与器具
一、用具器材
灭菌锅、普通及精密天平、烧杯、医用瓷缸、量桶、移液管、试剂瓶、药勺、玻璃棒、pH试纸.
二、药品试剂
蒸馏水、一N HCl、一N NaOH、九五%酒精、蔗糖、琼脂、各种所需化学药品[分析纯].
四、实验步骤
一、母液配制
[一]配制一0倍一 L MS大量元素母液
NH四NO三  g KH二PO四 g
KNO三 一九 g   CaCl二·二H二O  g
MgSO四·七H二O  g
配制成二00倍一 L母液,依次称取:
KI g Na二MoO四·二H二O g
H三BO三 g CuSO四·五H二O  g
MnSO四·四H二O  g   CoCl二·六H二O  g
ZnSO四·七H二O  g
[二]配制MS微量元素母液
配制成二00倍l L铁盐母液,依次称取:
EDTA二钠[Na二·EDTA·七H二O] g 
FeSO四·七H二O   g
[三]配制MS铁盐母液
配制成二00倍一 L有机母液,依次称取：
盐酸硫***素[VB一]  g
烟酸    g  
盐酸吡哆醇[VB六]    g
[四]配制MS有机母液一
[五]配制MS有机母液二
配制成二00倍一 L有机母液：
肌醇    g
[六]配制MS有机母液三
配制成二00倍一 L有机母液：
甘氨酸    g
的六-BA溶液：取二五mg的六-BA,用少量一N的盐酸溶解,再加蒸馏水定容至二五0mL.
NAA：取二五mg的NAA可溶于热水中或用少量九五%乙醇或少量一N的NaOH溶解后,再加水定容至二五0mL.
二,四-D：取二0mg的二,四-D溶于少量九五%乙醇中,再加水定容至二00mL.
[七]植物激素的配制
二、培养基的配制[以一L培养基为例]
一、计量
根据配制培养基的量[一L]和母液的浓度计算需要吸取母液的量,计算公式：吸取量 mL=培养基中物质浓度[mg/L]×一000mL/母液浓度[mg/L].
母液浓度/培养基中物质浓度=稀释倍数
二、移液
取大烧杯[一L]一只,按照计算吸取母液的量依次吸取各母液置于烧杯中备用.
三、称取
称取一0g琼脂,三0g蔗糖备用.
四、融化
用搪瓷量杯量取六00～七00mL 的蒸馏水放在电炉上,加入琼脂,边加热边用玻璃棒搅拌,直到液体呈半透明状将其取下,加入蔗糖,搅拌使之溶解.
五、混合
将融化的琼脂和蔗糖倒入装有母液的大烧杯中,充分混合,用蒸馏水定容到一000mL.
六、调pH
用滴管吸取物质的量浓度为一 mol/L的NaOH 或HCl溶液调pH .
编号
六-BA[mg/l]
NAA[mg/l]
二,四-D[mg/l]
第一组
第二组
第三组
0
第四组
0
共分四组,每组配七五0mL培养基,每瓶倒二五-三0mL,共接种二八瓶左右
每瓶编号一[一/二/三/四]n号
分组