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化工产品检验(董艳杰 陈亚东)课件高效液相色谱法.pptx

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文档介绍:高效液相色谱分析法
High Performance Liquid Chromatography (HPLC)
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HPLC是70年代以后发展最快的一个分析化学分支,现已成为生化、医学、药物、化学化工、食品卫生、环互补不足的色谱方法
灵敏度:气相﹥液相 应用范围:液相﹥气相
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六、色谱法的分类
吸附色谱(Absorption Chromatography)
组分对固定相表面吸附力的不同而分离
分配色谱(Partition Chromatography)
组分在固定相和流动相中的溶解度不同而分离
离子交换色谱(Ion Exchange Chromatography)
组份离子交换亲和力的差异而分离
体积排除色谱(Size Exclusion Chromatography)
组分分子量大小不同,对固定相的渗透力不同而分离
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§1-2 基本概念

一、色谱图(chromatogram)
检测器将流动相中各组分浓度变化转变为相应的电信号。
记录仪所记录下的浓度对分离时间的函数,称为色谱图。
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色谱过程特点:
①浓度对分离时间呈高斯曲线型
②色谱条件一定时,各组分都有一特定时间在图谱中出现,称为组分的保留时间。
③柱效一定时,组分保留值越小,峰越
窄;保留值越大,峰越宽。
④相邻峰的保留时间相差越大,越易分离。
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常用术语:
1. 基线 : 仅有纯流动相进入检测器时的流 出曲
线。
2.色谱峰: 响应信号大小随时间变化所形成的峰
形曲线。(正态分布)
3.峰高与峰面积:
峰高:色谱峰顶点与峰底之间的垂直距离
用h表示。
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峰面积:
峰与峰底之间的面积 ,用A表示。
二、色谱保留

1. 保留时间(tR)
从进样开始到柱后出现样品的浓度极大值所需的时间,用tR表示。
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2.分配系数K
组分在固定相和流动相间发生的吸附、脱附,或溶解、挥发的过程叫做分配过程。在一定温度下,组分在两相间分配达到平衡时的浓度比(单位:g/mL),称为分配系数,用K 表示:
分配系数是色谱分离的依据。


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分配系数K 的讨论
一定温度下,组分分配系数K越大,出峰越慢;
每个组份在各种固定相上的分配系数K不同;
选择适宜的固定相可改善分离效果;
各组分有不同K 值是分离的基础(差移速度)
某组分的K = 0时,即不被固定相保留,最先流
出。


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3.容量因子k’ (capacity factor)
一定温度下,组分在两相间分配达到平衡时的质量比。
1.K与k’都是与组分及固定相的热力学性质有关
的常数, 随分离柱温度、柱压的改变而变化
2.K与k’都是衡量色谱柱对组分保留能力的参数
,数值越大,该组分的保留时间越长。
3. 容量因子可以由实验测得。
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4. 选择性系数α
可用来衡量两物质的分离程度,用α表示。
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5.分离度
色谱分离目的:合理的时间内将样品中组分成功
分离
分离度:表示分离状况的一种度量
分离度影响因素:
保留值之差──色谱过程的热力学因素;
峰的宽度──色谱过程的动力学因素。
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讨论:
色谱分离中的四种情况:
① 柱效较高,ΔK(分配系数)较大,完全分离。
② ΔK 不是很大,柱效较高,峰较窄,基本分离。
③ 柱效较低,ΔK 较大,但分离的不好。
④ ΔK 小,柱效低,分离效果更差。
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分离度的表达式:
Rs=0.8:两峰的分离程度可达89%;
Rs=1:分离程度98%(达到定性定量分析的最低要求)
Rs=1.5:达99.7%(相邻两峰达到基线分离)。
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对浓度不同组分而言:
两个组分的分离度会随浓度比的增大而
减小
对多组分而言:
整个色谱分离的分离度取决于Rs最小值的两个峰。
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分离度影响因素

①峰的宽度(峰宽越小, Rs越大)
峰的宽窄主要反映了色谱分离的动力学特性
②两峰的保留时间之差(△tR越大, Rs越大)
反映了色谱分离的热力学特性

分离度基本
关系式:
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四.控制分离度方法
①改

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