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QIAGEN试剂盒提取DNA步骤.doc

上传人:buhuixin1314 2022/5/20 文件大小:33 KB

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QIAGEN试剂盒提取DNA步骤.doc

文档介绍

文档介绍:QIAGEN试剂盒提取DNA步骤
缓冲液AP1和AP3/E可能在储藏过程中沉淀,使用前检查, 必要时65摄氏度预热溶解(注意加完乙醇后就不能再加热)
缓冲液APW和AP3/E第一次使用时要加入适量乙醇(96%-100%)
研磨前擦拭工QIAGEN试剂盒提取DNA步骤
缓冲液AP1和AP3/E可能在储藏过程中沉淀,使用前检查, 必要时65摄氏度预热溶解(注意加完乙醇后就不能再加热)
缓冲液APW和AP3/E第一次使用时要加入适量乙醇(96%-100%)
研磨前擦拭工作台。
研钵里加入液氮,预冷。研磨材料,加3-5次材料,充分研磨。液氮预冷离心管后加入材料,加至1/2或2/3处。若暂时不加缓冲液,就放入至液氮冷冻,用时拿出。拿出后立即轻轻开盖,防止材料喷出。
加入440ml缓冲液AP1(必须为预热好的),。盖好后使劲颠倒混匀材料和缓冲液。
加4mlRNase后,剧烈涡旋,使管底的材料也与液体混合。
将混合物在65摄氏度下温浴15min,每5min中上下轻轻颠倒试管2-3次。准备冰盒。
加入130ml缓冲液AP2,上下颠倒混匀,在冰上放置5Min。
14000rpm/min离心5min.
仔细缓慢将上层液体(500ml)置于QIAshredder Mini Spin Colum(柱)中(紫色)。14000rpm/min离心2min.
将上步中的滤液(450ml)缓慢吸至一新的离心管(自己准备的Axygen离心管)中,注意别吸到管底细胞碎片小球。
(675ml)的缓冲液AP3/E。一定要仔细,慢慢抽吸至两者充分混匀。
将上步中650ml混合液(包括形成的沉淀)加入Dneasy Mini Spin Colum(柱)中(白色),其余的混合液留着,用于再次抽提。³8000rpm/min(一般用14000rpm/min)离心1Min,丢弃废液。准备灭菌的去离子水于65摄氏度水浴锅中预热。
剩余的混合液继续加入上一步的Dneasy Mini Spin Colum(柱)中,³8000rpm/min(一般用14000rpm/min)离心1Min,丢弃废液和收集管。
将Dneasy Mini Spin Colum(柱)下置试