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哺乳动物细胞表达系统
按照宿主细胞的类型，可将基因表达系统大致分为原核、酵母、植物、昆虫和哺乳动表达水平。
1 .2表达载体的结构元件
哺乳动物细胞表达载体的必要元件包括：一个高活性的启动子、转录终止序列和一个有效的mRNA翻译信号。可视实验需要加入标志基因、复制起始点序列、内部核糖体进入位点等。基于启动子/增强子是表达载体中最重要的元件，我们这里仅对它做简要介绍。
外源基因在哺乳动物细胞中的表达与多种因素有关，主要是启动子和增强子的强弱以及它们之间的搭配。
启动子需包含两个识别序列：mRNA转录起始点和TATA盒。TATA盒位于转录起
始值点上游25--30bp处，是引导RNA聚合酶在正确起始位点转录所必需的序列，即保证转录的精确起始。其他上游启动子元件常位于TATA盒上游100〜200bp之间。其功能是调节转
录的起始频率和提高转录效率。启动于和增强子受细胞类型的限制，在不同的细胞系中有很
大不同，因此需根据宿主细胞的娄型选择不同的启动子和增强子以便于目的基因的高效表达。目前常用的强启动子包括人巨细胞病毒早期启动子(CMV-IE)、人延伸因子1-亚基启动
子和Rous肉瘤长末端重复序列；Invitrogen公司开发的pcDNA、pEF和pRL三种系列载体即分别是以这三种启动子驱动目的基因的表达。近年来又发现了一些新的强启动子：如人leukosialin基因同和鼠3-磷酸甘油激酶l(PGKI)基因启动子，活性与CMV-IE相当；人编在蛋白(ubiquitin)C基因启动子不仅具有较高的活性，而且比CMV-IE、PGK1等启动子有更广泛的宿主细胞范围，几乎在转基因小鼠的所有组织细胞中都具有较高活性。核内小RNA(snRNA)启动子亦具有与CMV-IE相近的活性，此前认为该启动子的转录产物不具有正常mRNA的修饰过程和功能，虽然转录同样是由RNA聚合酶n完成；但Bartlett等的研
究显示，UlsnRNA启动子合成的lacZ基因RNA可被正确地在5'端加帽和3'端加polyA尾，并与核糖体结合引导Iacz蛋白的翻译。
常用的增强子有Rous肉痍病毒基因长末端重复序列和人巨细胞病毒增强子。james等利用
糖皮质类周醇诱导的鼠乳房瘤病毒(MMTV)启动子和鼠乳房痛病毒长末端重复序列
(MMTV-LTR),在CHO细胞中表达分泌的碱性磷酸酶，产量为利用常规的SV40和CMV
启动子的10倍，。
构建杂合的启动子是获得新启动子的一个重要途径，比如由人ubiquitinC启动区序
列与CMV增强子组成的杂合启动子、由SV40早期启动子和人I型T淋巴细胞病毒LTR中的增强子序列(R-U5片段)组成的SR-”启动子的活性均与CMV-IE相当；而由鸡3-肌动蛋白启动子和CMV增强子序列构成的杂合启动子不仅活性比CMV—IE高，而且具有更为
广谱的宿主细胞范围。Novagen公司的pBacMam表达系统即是以该杂合启动子驱动目的基因的转录。
另一类杂合启动子是由活性很低的启动子与数个转录激活因子结合位点串联而成，这些位点与转录激活因子的结合受细胞外小分子药物的调控；这类