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基因扩增实验室常用仪器的使用.ppt

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基因扩增实验室常用仪器的使用.ppt

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基因扩增实验室常用仪器的使用.ppt

文档介绍

文档介绍:基因扩增实验室常用仪器设备的使用和维护
卫生部临床检验中心
王露楠
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PCR热循环仪(DNA扩增仪)
高速( 冷冻)离心机
漩涡振荡混旋器
恒温水浴箱/恒温金属浴
洗板机(PCR-ELISA)
酶标仪(PCR析96个样品,荧光检测波长范围530-590nm。
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GeneAmp 5700型荧光定量PCR仪
影响测定结果的因素
域值设定
光路维护
加样的准确性和反应体系的均一性
反应管中是否有气泡
反应管不符合荧光检测要求或疏水性差
反应管或反应槽被荧光物质污染
反应管用记号笔做标记
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Lightcycler 荧光定量PCR系统
原理和特点
可使用外标法定量,可加内对照,可做熔点曲线分析。
单一光路的三个检测点对样本同时进行三个波长的荧光检测,扩赠与检测同时进行,提供实时分析和在线监测。引入独特的颜色补偿试剂和软件以消除个检测通道其它染料荧光的干扰。
一次可做32个样本。
公用热室,保证单次PCR个样本的状况连续一致。循环速度快,20-30分钟完成30-40个循环,一次检测样本数32个。
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Lightcycler 荧光定量PCR系统
清洁和维护
反应槽和内壁均可用家用洗涤剂清洁,但反应槽必须在取出后才能进行清洁。
当毛细管破碎时,首先用仪器厂家提供的毛刷将碎片去除,再用70%乙醇清洗反应槽。
光路部分须用无水乙醇清洁
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ABI 7000型荧光定量PCR仪
检测原理和特点
采用精确的化学原理和多组分计算方法,可准确检测和处理PCR指数级扩增的数据,得出高精度重现的Ct值,多色荧光检测,实时数据监控,并有熔点曲线分析。
荧光波长范围500-660nm,可分别用于TaqMan 荧光探针技术作定量PCR和SYBR Green荧光染料作定量PCR。
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杭州博日 Line-gene
检测原理和特点
内标定量和外标定量,激发光波长470nm,荧光检测波长530nm、640nm和710nm。
对PCR扩增全过程进行实时动态监测。
一次最多可同时分析33个样品,最大循环数为99。
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高速( 冷冻)离心机
使用方法
注意事项
维护和保养
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使用方法
离心机应放置在水平坚固的地板或平台上,并力求使机器处于水平位置以免离心时造成机器震动。
打开电源开关,按要求装上所需的转头,将预先平衡好的样品放置于转头样品架上(离心筒须与样品同时平衡),关闭机盖。
按功能选择键,设置各项要求:温度、速度、时间、加速度及减速度,带电脑控制的机器还需按储存键,以便记忆输入的各项信息。
待离心机完全停止转动时打开机盖,取出离心样品,用柔软干净的布擦净转头和机腔内壁,待离心机腔内温度与室温平衡后方可盖上机盖。
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注意事项
机体应始终处于水平位置,外接电源系统的电压要匹配,并要求有良好的接地线。
开机前应检查转头按装是否牢固,机腔有无异物掉入。
样品应预先平衡。
离心机运行时,离心机周围30cm范围内不能有人和危险物品。
挥发性或腐蚀性液体离心时,应使用带盖的离心管,并确保液体不外漏以免腐蚀机腔或造成事故。
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注意事项
易燃易爆以及易与其他物质发生反应的物质不能离心。
在没有相应的防护措施时,不能离心有毒的、放射性的物质或病原微生物。
离心机运行时不可人为地打开盖子。
如果转头和盖子有可见的腐蚀或磨损的痕迹,则应立即停止使用。
使用的玻璃或塑料离心管应能承受相应的离心力并大小合适。非金属转头不可用紫外照射。
如果被离心的物品密度大于说明书的规定范围,应根据RCF计算公式,减小离心体积。
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维护和保养
转头应定期清洗和消毒。擦拭离心机腔时动作要轻,以免损坏机腔内温度感应器。
使用消毒液处理时,温度不可超过25℃,时间不可超过规定时间。
可以用高压消毒的转头,应在清洗后,121 ℃消毒20分钟,转头务必平放,并不受挤压,以免变形。
每次操作完毕;应作好使用情况记录,并定期对机器各项性能进行检修。
离心过程中若发现异常现象,应立即关闭电源,报请有关技术人员检修。
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洗板机
机理及主要类型
国内常见洗板机简介
选购洗板机的注意事项
洗板机使用中注意事项
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机理及主要类型
简易型也可称为手动式洗板器,一般由负压泵与清洗头,可完成最基本的吸液,也有可完成加液动作的装置。这类装置,由于成本极低,使用方便,工作量不大时可以使用。
自动式洗板机:可根据用户的设置完成规定次数与条数的洗板工作,有的具有简单的存贮功能。主要目的是利用自动化技术,替代手工劳动。其中有条式与板式之分。如LABS