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文档介绍

文档介绍:Uscn Life Science Inc. Wuhan
网址:
电话: +86 27 84259552
传真: +86 27 84259551
E-mail: ******@uscnkPBS 洗 3 次;
3)物理方法裂解细胞(可先超声破碎细胞,再反复冻融 ):
i 超声破碎:取适量 PBS 重悬细胞,用一定功率的超声波处理细胞悬液,使细胞急
剧震荡破裂。
ii 反复冻融:将待破碎的细胞在 -20 以下冰冻,室温融解,反复 3 次,使细胞溶胀
破碎。
4)将标本于 2-8 1500xg 离心 10 分钟,收集上清备用。
3、其它生物标本:请 1000 g 离心 20 分钟,取上清即可检测,或将上清置于-20 或-80
保存,但应避免反复冻融。
注意:
1、 以上标本均 需密封保存 ,4 保存应小于 1 周,-20 不应超过 1 个月,-80 不应超
过 2 个月。
2、 标本使用前应缓慢均衡至室温,不应加热使之融解。
试剂准备
1、 使用前将所有的试剂和标本缓慢均衡至室温 (18-25 ),试剂不能直接在 37 溶解。
2、 标准品 (冻干品 ):每瓶 标准品用 标准品稀释液 稀释至 1mL,盖好后室温静置大 约
10 分钟,同时反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为 40 ng/mL(贮液)。先将其稀释为 10
ng/mL(标准曲线最高浓度 )后,再 准备 7 个稀释标准品的 EP 管,每个 EP 管中加 入
500 的标准品稀释液 ,如图所示依次倍比稀释成 10 ng/mL,5 ng/mL, ng/mL,
ng/mL, ng/mL, ng/mL, ng/mL,标准品稀释液( 0 ng/mL)
直接作为空白孔。为保证实验结果有效性,每次实验请使用新的标准品溶液。Tube 1 2 3 4 5 6 7 8 9
ng/mL 40 10 5 0
3、 检测稀释液 A 及检测稀释液 B:用 6mL 蒸馏水或去离子水 将 6mL 浓检测液 A 及 B
稀释至 12mL,进行 2 倍稀释,稀释后的工作液不宜进行冷冻保存。
4、 检测溶液 A 及检测溶液 B:Detection A 及 Detection B 在使用前请