文档介绍：It is applicable to work report, lecture and teaching
蛋白质类药物分析(fēnxī)
第一页，共151页。
第九章 蛋白质和多肽(duō tài)类药物的分析
第二页，共技术药:单位（U、AU、IU）
第十九页，共151页。
（二）生物学活性测定方法分类(fēn lèi)
1、动物基础的活性测定
1）离体动物器官法：脑利钠肽的兔主动脉
2）体内测定法：EPO的小鼠网织红细胞
2、细胞基础的活性测定
1）促细胞生长(shēngzhǎng)法：大多数细胞因子类
2）抑制细胞生长(shēngzhǎng)法：细胞***、血管抑制剂
3）间接保护细胞法：IFN保护WISH
3、酶学基础的活性测定：重组酶类
4、受体-配体、抗原-抗体结合基础的活性测定：抗原决定簇与活性中心常不一致
第二十页，共151页。
（三）生物学活性测定方法选择(xuǎnzé)
1、细胞(xìbāo)培养法＞离体器官法＞体内法
2、细胞(xìbāo)染色标记方法：MTT＞3H-Thymidine＞流式细胞(xìbāo)仪（测细胞(xìbāo)周期）
3、定量法＞半定量法＞定性法
4、生物学活性不一定与临床药效类型一致
工艺稳定、测生物活性特别复杂时，可替代。如rh-GH用HPLC
第二十一页，共151页。
（四）生物学活性测定(cèdìng)（Chp附录ⅩC）
样品：原液、成品
标准：不同生物活性测定方法的规定标准
测定方法 规定标准
动物基础的活性测定 70%~130%标示量
细胞(xìbāo)基础的活性测定 80%~120%标示量
酶学基础的活性测定 85%~115%标示量
结合反应的活性测定 85%~115%标示量
第二十二页，共151页。
（五）蛋白质药物(yàowù)的比活性
样品：原液
定义与计算：比活性：单位重量蛋白的活性单位（IU/mg）
意义：真实反映有活性的蛋白质所占的比例(bǐlì)，厂家间、表达系统间、批间比较
便于配制成品
第二十三页，共151页。
第二节 蛋白质和多肽(duō tài)类药物分析
一、鉴别
二、结构确证
三、检查
四、含量(hánliàng)测定
五、残余杂质检测
六、安全性及其他检查
第二十四页，共151页。
一、鉴别(jiànbié)
鉴别(jiànbié)药物的真伪
（一）化学鉴别(jiànbié)：双缩脲反应（是否蛋白质/多肽类）
第二十五页，共151页。
（二）紫外吸收光谱扫描(sǎomiáo)（Chp附录ⅡA）
样品：原液
方法：紫外扫描
标准：最大吸收波长与特征波长一致、批与批间一致
一级结构(jiégòu)不含芳香族氨基酸重组药物，在280nm附近没有最大吸收峰，可不做紫外吸收光谱测定
第二十六页，共151页。
重组(zhònɡ zǔ)脑利钠肽(rhBNP)
第二十七页，共151页。
（三）免疫(miǎnyì)印迹
方法：通常用免疫印迹（immunoblotting）和斑点(bāndiǎn)免疫（Dot Immunobinding）进行鉴定，特别当电泳出现两条或两条以上区带时则应该用免疫印迹进行鉴定
标准：阳性
第二十八页，共151页。
第二十九页，共151页。
SDS-PAGE
Western blot
第三十页，共151页。
（四）HPLC法
根据待测样品（T）与标准品（S）/对照(duìzhào)品方法的保留时间（t0）的一致性进行定性分析
当T的t0与S完全相同，则能判定T可能与S为同一物质；特别是如果色谱条件改变，T的t0与S的t0仍能一致，则基本判定是同一物质
第三十一页，共151页。
二、结构(jiégòu)确证
等电点（PI）测定
紫外光谱扫描(sǎomiáo)
末端氨基酸序列测定
肽图分析
氨基酸组成分析
第三十二页，共151页。
（一）等电点测定(cèdìng)（Chp附录ⅣD）
不同蛋白质或多肽具有不同等电点，可以(kěyǐ)表征药物纯度
等电点测定是控制重组产品生产工艺稳定性的重要指标：均一的重组蛋白质只有一个等电点，有时因加工修饰等影响可出现多个等电点，但应有一定的范围
第三十三页，共151页。
方法：
1）等电聚焦电泳法（IEF）：
2）毛细管电泳法（CE）：该法用紫外检测，适用于某些不易(bù yì)染色的Pr/多肽，如EGF、hCGRP等制品的测定
标准:标准：有明显主带、理论值±、批与批间一致
第三十四页，共