pcr扩增技术.ppt

文档介绍：PCR扩增技术
李琛琛
20123303006
11月13日
一、PCR定义
二、PCR原理
三、PCR反应体系
四、PCR扩增条件
五、PCR结果
一、PCPCR扩增技术
李琛琛
20123303006
11月13日
一、PCR定义
二、PCR原理
三、PCR反应体系
四、PCR扩增条件
五、PCR结果
一、PCR的定义
PCR(Polymerase Chain Reaction)
聚合酶链式反应,是一种在体外快速扩增特定基因或DNA序列的方法。
PCR是又称为基因的体外扩增法。
PCR是基因扩增技术的一次重大革新，它可将极微量的
靶DNA特异地扩增上百万倍。
二、PCR的原理
PCR(Polymerase Chain Reaction)
变性：在加热或碱性条件下可使DNA双螺旋的氢键断裂，形成单链DNA。
退火：是模板与引物的复性。引物是与模板某区序列互补的一
小段DN***段。
延伸：从结合在特定DNA模板上的引物为出发点，将四种脱氧核苷酸以碱基配对形式按5’→3’的方向沿着模板顺序合成新的DNA链。
三、反应体系
PCR管内配置25ul反应体系：
CK(ul)
L-5(ul)
模板DNA
0
1
引物
×2
×2
镁离子


10×Buffer


Taq酶


dNTP


ddH2O


Total
25
25
基因扩增仪
四、扩增条件
(1) 95℃变性5min，
(2) 94℃变性30s，
(3) 50℃退火30s，
(4) 72℃延伸1min。
(5) 重复(2)-(4)30次
（6）72℃延伸10min。
琼脂糖凝胶电泳槽
凝胶成像系统
五、PCR结果
2000
1000
750
500
250
125
M L-5
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