文档介绍：实验二 总糖和还原糖的测定 (3，5～二硝基水杨酸法)
《食品生物化学实验》课程
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掌握3，5～二硝基水杨酸法测定待测样品的总糖和还原糖含量的基本原理，学会处理721型或722型分光光度计出现的问题
一、实验目实验二 总糖和还原糖的测定 (3，5～二硝基水杨酸法)
《食品生物化学实验》课程
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掌握3，5～二硝基水杨酸法测定待测样品的总糖和还原糖含量的基本原理，学会处理721型或722型分光光度计出现的问题
一、实验目的
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二、实验原理
还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。还原糖是指含有自由醛基或***基的糖类，单糖都是还原糖，双糖和多糖不一定是还原糖，其中乳糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。
利用糖的溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来，对没有还原性的双糖和多糖，可用酸水解法使其降解成有还原性的单糖进行测定，再分别求出样品中还原糖和总糖的含量（还原糖以葡萄糖含量计）。
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本实验是利用3，5～二硝基水杨酸溶液（DNS法）与还原糖溶液共热后被还原成棕红色氨基化合物，在一定范围内还原糖的量和棕红色物质深浅的程度成一定比例关系，可用于比色测定。操作简便，快速，杂质干扰较少。
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三、实验步骤
1、葡萄糖标准曲线的制定
葡萄糖标准液的配制：准确称取100mg分析纯的无水葡萄糖（预先在105℃干燥至恒重），用少量蒸馏水溶解后，定量转移到100ml容量瓶中，再定容到刻度，摇匀。浓度为1mg/ml。
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取7支25×250mm的试管，分别按下表加入试剂：
管 号
0
1
2
3
4
5
6
葡萄糖标准液（ml）
0
相当于葡萄糖量(mg)
0
蒸馏水（ml）
3,5二硝基水杨酸(ml)
将各管溶液混合均匀，沸水浴加热5min，取出后立即用冷水冷却到室温，，摇匀。于520nm波长处测定OD值。以葡萄糖毫克数为横坐标，光密度值为纵坐标，绘制标准曲线。
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2、样品中总糖和还原糖含量的测定
（1）样品中还原糖的提取：
准确称取10g新鲜材料（或2g材料干样粉末），放在100ml烧杯中，先以少量水调成糊状，然后加50～60ml蒸馏水，于50℃恒温水浴中保温20min，过滤，将滤液收集在100ml容量瓶中，再定容至100ml。
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（2）样品中总糖的水解提取：
准确称取10g新鲜材料（或1g材料干样粉末），放在锥形瓶中，加入10ml 6 mol•L-1 盐酸，15ml水，在沸水浴中加热30min，取出一、二滴置于白瓷板上，加1滴碘～碘化钾溶液检查水解是否完全。如已水解完全，则不呈现蓝色。冷却后加入1滴酚酞指示剂，以10%氢氧化钠溶液中和至溶液呈微红色，过滤并定容到100ml。再精确吸取上述溶液10ml于100ml容量瓶中，定容至刻度，混匀备用。
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（3）样品中糖含量的测定： 取7支25×250mm试管分别按下表加入试剂：
管 号
空白
还原糖
总糖
0
1
2
3
1
2
3
样品溶液（ml）
0
蒸馏水（ml）
2
3,5二硝基水杨酸(ml)
OD
加完试剂后，与制作标准曲线时相同的操作测定样品糖含量。
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四、实验结果
在Excel绘制葡萄糖标准曲线，并求出标准线性方程。
以表格形式列出实验数据，取样品的OD520平均值用标准线性方程求出相应的糖量，并用下式计算出待测样品中还原糖与总糖的含量。
还原糖（mg•g-1）=
还原糖毫克数×提取液总体积（ml）×稀释倍数
测定用提取液体积（ml）×样品重量（g）
总糖（mg•g-1）=
样品水解后还原糖毫克数×提取液总体积（ml）×稀释倍数
测定用提取液体积（ml）×样品重量（g）
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五、讨论分析
1、在被测样品中，还原糖可能是些什么糖？总糖包括哪些？
2、用来测定总糖的样品，为什么要加盐酸水解？而在其测定前，又为何要用Na