文档介绍：HPLC测定四川梓潼产葛根和粉葛中四种异黄酮含量的分析
摘要:采用YMC-Pack ODS-A C18色谱柱(250 mm× mm,5 μm)测定四川梓潼产葛根和粉葛中4种异黄酮(葛根素、3′-甲氧基葛根素、大豆苷和大豆ent 1260 Infinity Series高效液相色谱仪;XY-200型高速多功能粉碎机(浙江省永康市松青五金厂);BSA124S电子天平,十万分之一(德国赛多利斯集团);SK7200LH超声波清洗仪(上海科导超声仪器有限公司);UPR-11-10T超纯水器。
葛根素(批号为110752-200912)、大豆苷(批号为111738-200501)、大豆苷元(批号为111502-200402)对照品购于中国食品药品检定研究院;3′-甲氧基葛根素(批号为MUST-13092410)对照品购于成都曼斯特生物科技有限公司。甲醇为色谱纯,水为超纯水(自制)。
方法
供试品溶液的制备精密称取梓潼葛根和粉葛粉末(过3号筛) g,置于圆底烧瓶中,精密加入50 mL 30%乙醇,称定质量,超声处理1 h,放冷,再称定质量,用30%乙醇补足失重,摇匀, μm微孔膜过滤,取续滤液,即得。混合对照品溶液的制备分别精密称取葛根素、3'-甲氧基葛根素、大豆苷和大豆苷元对照品适量,置于10 mL量瓶中,甲醇定容,摇匀。 mL,置于5 mL量瓶中,甲醇定容,、、、 μg/mL,保存于4 ℃冰箱中,备用。
色谱条件 YMC-Pack ODS-A C18色谱柱(250 mm× mm,5 μm);流动相水(A)-甲醇(B),梯度洗脱(0~10 min,25% B;10~35 min,25%~44% B;35~40 min,44%~49% B;40~45 min,49%~60% B;45~55 min,60%~25% B); mL/min;柱温22 ℃;检测波长254 nm;进样量10 μL。
2 结果与分析
HPLC色谱
HPLC色谱见图1。
线性关系考察
吸取“”项下混合对照品溶液1、2、6、10、 15 μL,在“”色谱条件下进样,记录峰面积。以峰面积为纵坐标,对照品进样量为横坐标进行线性回归[10],结果见表1。
精密度试验
精密吸取“”项下混合对照品溶液10 μL,連续进样6次,测得葛根素、3′-甲氧基葛根素、%、%、%、%,表明仪器精密度良好。
稳定性试验
取同一供试品适量,按“”项下方法制备供试品溶液,于0、2、4、8、12、24 h在“”项色谱条件下测定,记录色谱图,测得葛根的葛根素、3′-甲氧基葛根素、%、%、%、%;粉葛的葛根素、3′-甲氧基葛根素、%、%、%、%,表明供