文档介绍：实验十六 真核基因组 DNA的分离纯化
核酸的分离与提取是分子生物学研究中最重要的基本技术之一，
核酸样品的质量将直接关系到实验的成败。
核酸分离提取的原则
核酸包括 DNA、RN
%
SDS
20 μg/ml
RNase A
2、平衡酚（用
Tris
－ Cl
饱和， ），
3、***仿
/ 异戊醇（
24： 1v/v
）
4、 3mol/L
乙酸钠（
NaAc， ）
5、冷无水乙醇（ AR）
6、 70%乙醇（ -20 ℃静置）
7、 TE 缓冲液（ 10mmol/L Tris
－ Cl 、 1mol/L EDTA ()
【操作步骤】
1、根据样品类型，采用以下方法之一作为步骤 1：
a、细胞样品
贴壁培养细胞约
107 个，用冰预冷的
Tris
缓冲液（
TBS，见附录）冲洗
2 次，以细胞刮棒收
集于 TBS中。离心 1500g× 10min ，弃上清。或用胰酶消化后再离心收集，以 TE（ ）重悬细胞离心洗涤 1~2
次，悬浮生长的细胞，于 4℃ 1500g 离心 10min 收获细胞，以 TBS重悬细胞离心洗涤 1~2 次。
3
加等体积 2×组织细胞裂解液混匀。或从液氮中取出组织于陶瓷研钵中，加少许液氮研碎，将粉末转入
管。（液氮操作，应注意保护眼、手以免冻伤） 。
c、血液标本 新鲜血液与 ACD抗凝剂按 6： 1 进行混匀， 0℃以下可保存数天或 -70 ℃长期冻贮、备用。
ACD抗凝剂配方：柠檬酸
柠檬酸钠
右旋葡萄糖
抗凝血离心
1500g× 10min ，弃上清（血浆）（冷藏血液于水浴中融化后用等体积
PBS稀释，离心
3500g× 15min
弃上清）。
2、将以上各种来源的组织加组织细胞裂解液 400~500 μ l ，混匀于
37℃温浴
12h~24h，或
37℃温浴
1h 后转
50℃水浴 3h（裂解细胞、消化蛋白） ，并经常摇动。
3、反应液冷却至室温加
500μ l
平衡酚，缓慢颠倒
10min
混匀。
4、离心 5000g × 15min，转上层水相于新 Ep 管中，（必要时重复酚抽提一次）
5、加***仿 / 异戊醇（ 24:1 ） 450μ l ，混匀后离心 5000g× 10min 。
。
6、转上层水相于新 Ep 管中，加 1/10 体积 3mol/LNaAc 和
7、离心 10000g× 15min ，弃上清。
8、以 70%冷乙醇洗涤 1~2 次，真空抽干或自然吹干， （勿使
倍体积无水乙醇，混