文档介绍：紫外可见分光光度法
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概 述
基于物质对光的选择性吸收而建立起来的分析方法称吸光光度法，它包括比色法和分光光度法。
紫外-可见分光光度法是研究物质在紫外、可见光区的分子吸收光谱
，非散射光；
。
在实际工作中经常发现标准曲线不成直线的情况，特别是当吸光物质的浓度高时。
A
C
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引起偏离朗伯—比耳定律的原因
1 非单色光作为入射光引起的偏离
为克服非单色光引起的偏离，首先应选择比较好的单色器。此外还应将入射波长选定在待测物质的最大吸收波长且吸收曲线较平坦处。
图2-4 非单色光的影响
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2．溶液浓度的影响
当溶液浓度较大时，吸光质点间可能发生缔合等相互作用，直接影响了它对光的吸收。因此，朗伯-比耳定律只适用于稀溶液。
3．化学反应的影响
溶液中存在着解离、缔合、互变异构、配合物的形成等化学平衡，化学平衡与浓度、pH等其他条件密切相关。不同条件可导致吸光质点浓度变化，吸光性质发生变化而偏离朗伯-比耳定律。
消除方法为控制反应条件。例如，在铬酸盐或***盐溶液中存在下列平衡：2CrO42- + 2H+ Cr2O72- + H2O 。CrO42-、Cr2O72-的颜色不同，吸光性质也不同。用光度法测定CrO42-或Cr2O72-含量时，溶液浓度及酸度的改变都会导致平衡移动而发生对朗伯-比耳定律的偏离，为此应加入强碱或强酸作缓冲溶液以控制酸度。
4．非平行光和光散射的影响
当入射光是非平行光时，所有光通过介质的光的光程不同，引起小的偏离。另外，当溶液中含有悬浮物或胶粒等散射质点时，入射光通过溶液时就会有一部分光因散射而损失掉，使透过光强度减小，测得的吸光度增大，从而引起偏离吸收定律。
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紫外可见分光光度计
光源
单色器
吸收池
检测器
显示系统
光源
单色器
吸收池
检测器
显示
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作用--提供入射光
在整个紫外光区或可见光谱区可以发射连续光谱，具有足够的辐射强度、较好的稳定性、较长的使用寿命。
可见光区：钨灯作为光源，其辐射波长范围在320～2500 nm。
紫外区：氢、氘灯，发射200～375 nm的连续光谱。
1. 光源
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作用：将光源发射的复合光分解成单色光并可从中选出一任波长单色光。
①入射狭缝：光源的光由此进入单色器；
②准光装置：透镜或返射镜使入射光成为平行光束；
③色散元件：将复合光分解成单色光；棱镜或光栅；
④聚焦装置：透镜或凹面反射镜，将分光后所得单色光聚焦至出射狭缝；
⑤出射狭缝。
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样品室放置各种类型的吸收池
（比色皿）和相应的池架附件。
在紫外区须采用石英池，可见区一般用玻璃池。
注意：用作盛空白溶液的比色皿与盛试样溶液的比色皿应互相匹配，即有相同的厚度与相同的透光性。为了减少反射损失，比色皿的光学面必须完全垂直于光束方向。
不能用手指拿比色皿杯的光学面，用后要及时洗涤，可用温水或稀盐酸，乙醇以至铬酸洗液（浓酸中浸泡不要超过15分钟），表面只能用柔软的绒布或拭镜头纸擦净。
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利用光电效应将透过吸收池的光信号变成可测的电信号，常用的有光电池、光电管或光电倍增管。
检流计、数字显示、计算机进行仪器自动控制和结果处理。
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紫外可见分光光度计的类型
按光路结构可分为：
(如上分厂的721型、722型)；
(如国产710型，730型)；
(如国产WFZ800-5型）
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紫外可见分光光度的使用
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721分光光度计操作步骤
。为使测定稳定，将电源开关打开，使仪器预热20min，为了防止光电管疲劳，不要连续光照。预热仪器和不测定时应将比色皿暗箱盖打开，使光路切断。
。根据实验要求，转动波长调节器，使指针指示所需要的单色光波长。
。旋动灵敏度档，使其固定于某一