文档介绍：实 验 一
植物组织中总糖及还原糖的测定
—3,5-二硝基水杨酸比色法
学时：3
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1、掌握还原糖和总糖测定的基本原理。
2、掌握比色法测定还原糖的操作方法。
一、实验目实 验 一
植物组织中总糖及还原糖的测定
—3,5-二硝基水杨酸比色法
学时：3
整理课件
1、掌握还原糖和总糖测定的基本原理。
2、掌握比色法测定还原糖的操作方法。
一、实验目的：
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1、还原糖：指含有游离的半缩醛(***)基糖。
单糖都是还原糖；某些二糖是还原糖（如麦芽糖、乳糖等）；多糖为非还原糖。
2、总糖的提取及双、多糖的酸水解。
利用糖的溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来，对没有还原性的双糖和多糖，可用酸水解法使其降解成有还原性的单糖进行测定，再分别求出样品中还原糖和总糖的含量（还原糖以葡萄糖含量计）。
二、实验原理:
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2、还原糖与3,5-二硝基水杨酸(DNS)试剂反应：
在碱性条件下，还原糖与DNS试剂反应，还原糖被氧化成糖酸及其它产物， DNS被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。
3-氨基-5-硝基水杨酸
(棕红色,A540)
3,5-二硝基水杨酸
(DNS)
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3、在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质(3-氨基-5-硝基水杨酸)颜色的深浅成正比关系，利用分光光度计，在540nm波长下测定光密度值，查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖的含量。
由于多糖水解为单糖时，每断裂一个糖苷键需加入一分子水，。
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1、实验材料：苹果（ g）
2、仪器：水浴锅；可见分光光度计等。
3、试剂：
（1）1 mg/mL葡萄糖标准液
（2）3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂(碱性)
（3）6M HCl和6M NaOH
三、实验材料、仪器和试剂：
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四、实验步骤：
1、葡萄糖标准曲线的绘制
2、还原糖的提取
3、样品含糖量的测定:
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1、葡萄糖标准曲线的绘制: 取7支试管，按下表操作，以标准葡萄糖含量为横坐标，对应的吸光值为纵坐标，绘制标准曲线。
管
号
葡萄糖
标准液
mL
蒸馏水
mL
DNS
mL
沸水
浴
光密度值
OD540nm
葡萄糖含
量（μg）
0(参比溶液)
0
1
5min
冷却
0
1
200
2
400
3
600
4
800
5
0
1000
χ1
还原糖提取液
蒸馏水
mL
4
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2、还原糖的提取
，加水2-3ml，充分研磨。
用2-3ml蒸馏水分三次冲洗研钵(总体积小于10 ml)，转入试管中。
在50℃水浴中恒温20分钟，冷却后于3000转离心5分钟。
取上清转入试管中，用蒸馏水定容20毫升，待测。
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3、样品含糖量的测定:
，按上表操作。
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还原糖含量(μg/ g )=
五、计算：
还原糖含量χ1(μg) ×样液总体积
测定用样品液体积×样品鲜重(g)
总糖含量(μg/ g )=
水解后还原糖含量 (μg) ×样液总体积×
测定用样品液体积×样品鲜重(g)
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六、思考题：
1、何谓还原糖？
2、本实验的注意事项?
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