文档介绍：实验二传代细胞培养与病毒在传代细胞中的培养一、实验目的
了解倒置显微镜的构造与使用，了解不同传代细胞的形态及接蠹后的病变特征，掌握细胞的传代培养方法、病蠹接种方法及收蠹方法。
二、常用细胞的种类BHK-21:仓鼠肾传代细胞PK-15:猪上层液体，再加DMEM如此反复冲洗2-3遍。
6、%夷酶，-,振荡混匀后置37C水浴中感作30分钟，每10分钟轻轻摇动一次，使细胞消化完全（组织块变散松，沉降渐变缓慢时即表示消化足够）。
7、取出，静置几分钟，小心吸弃上层胰酶溶液，用DMEK洗2次后，加入生长液5ml,用大口径吸管反复吹打，使细胞游离。
8、静置几分钟，使未消化好的组织块下沉。
9、细胞计数
取细胞悬:+%结晶紫一枸椽酸（）溶液，室温或37C温箱中5-10min,充分振荡后进行计数。
按白细胞计数法计算4角4个大方格内的细胞总数（N）。
每ml悬液中的细胞数（n）=N/4X10000XK（稀释倍数）。
活细胞数应在90恕上。
10、将计数好的细胞稀释到合适的浓度，使细胞量约为4-6X106个/ml,分层于细胞培养瓶中，每瓶1ml,再补加DME阶长液至10ml,盖上盖子，置于37C怛温箱中培养。
。表示可计数•表示不计数
五、结果的观察
丁培养后每天观察结果，至长层单层。细胞量较大时，一天即可长成单层,细胞呈纤维状。
实验四病毒感染力的滴定(TCI&的测定)一、实验目的
了解病蠹感染力测定的几种常用方法，掌握半数细胞培养物感染量TCID50的操作步骤、计算方法及含义。
二、测定届毒感染力的方法半数致死量LDo(50%lethaldose):用动物或鸡胚来检测半数鸡胚感染量EID5o(egg50%infectivedose):用鸡胚来检测:用细胞
半数细胞培养物感染量TCID50(50%tissuecultureinfectivedose)来检测蚀斑形成单位（plaqueformingunit,PFU:用细胞来检测三、材料1、长满单层的细胞1瓶2、胰酶、吸球、吸管、生长液3、96孔细胞培养板4、加样器、枪头5、病蠹液（PRV四、TCID50的操作步骤1、在宵霉素瓶或离心管中将病蠹液作连续10倍的稀释，从10-1-10-10。
2、将稀释好的病蠹接种到96孔微量培养板中，每一稀释度接种一纵排共8孔,每孔接种
100U03、在每孔加入细胞悬:液100U，使细胞量达到2~3X105个/ml。
4、设正常细胞对照，正常细胞对照作两纵排。（100U生长液+100U细胞悬:液）5、逐日观察并记录结果，一般需要观察5-7天。
6、结果的计算，按Reed-Muench两氏法或Karber法五、TCID50的计算方法CPE:细胞病变效应1、Reed-Muench两氏法
病毋液稀释度
出现CPE
孔数
无CPE5L数
累计
出现CPEJL所
占的％
CPEJL数
无CPEJL数
10-
8
0
27
0
100(27/27)
10-2
8』
k
0
19
0
[100(19/19)
10-3|
7
1
11
1
(11/1