文档介绍：This manuscript was revised on November 28, 2020
反硝化细菌项目说明书
筛选好氧反硝化细菌处理工业废水
设计说明书
设计者吕海鹏鹿宗贵韩飞怡
指导老师柯涛
硝化细菌。
主要仪器:超净工作台（SWCJ-A），高压蒸汽灭菌锅，恒温培养箱(SPX-160型)，摇床（HNY-200D），电子天平等。
主要原料及试剂:BTB培养基（琼脂20g、KNO31g、KH2PO41g、FeCl2·、CaCl2·、MgSO4·7H2O1g、、溴百里酚蓝(BTB)(1%乙醇溶液)1mL，用1mol/～，121℃灭菌20min），LB培养基（KNO31g、KH2PO41g、FeCl2·、CaCl2·、MgSO4·7H2O1g、，121℃灭菌20min）。格里斯试剂A、B液，二苯***试剂，其他试剂均分析纯。
取样
南阳市污水处理厂曝气池中活性污泥；
南阳师院十二里河污泥；
南阳师院阳子湖湖水；
南阳师院周围麦田土样。
采用梯度稀释法将污泥样品稀释至适当浓度，，置入恒温培养箱，30℃下培养2～3d后，用接种环挑取使周围培养基出现蓝色晕圈的单菌落，进行分离纯化即为初筛菌株。
将初筛筛选出的好氧菌株接种到LB液体培养基的试管中,每支试管分装培养基的高度约为4～5cm，每株重复3管，在30℃恒温下培养7d以上，每天观察其生长情况，检查试管是否混浊。并用格里斯（Griess）试剂检查培养液中是否已出现亚***根。如果呈桃红或红色反应，说明***盐已经在反硝化菌作用下生成亚***盐，即为正反应。如为负反应，则就要检查培养液中是否还有***根，即置白瓷板凹窝中加浓硫酸和二苯***试液各
2滴，然后滴入待测液1~2滴，如果有蓝色出现，说明有***根存在，即未进行反硝化作用，受检查管无反硝化细菌存在，如不出现蓝色，则说明***根已完全消失，且作为硝化作用中间产物的亚***根也完全消失，这证明受检查管的反硝化作用很强烈，有反硝化细菌存在，检查时应与空白对照，将检出具有反硝化作用的好氧菌作为复筛菌[91]，并将其接种于3号培养基的试管斜面，作为备用菌。
该方法是利用在培养液中滴加格里斯试剂、二苯***试剂和奈氏试剂,通过显色反应指示亚硝态氮、硝态氮和氨态氮的变化[31],从而筛选出对硝态氮有较强利用效果的菌株。在培养液中加入1～2滴格里斯试剂,以检测是否有亚***盐的存在,如溶液立即呈粉红色或棕色等,则***盐被还原成亚***盐,说明该溶液中具有好氧反硝化作用的细菌。如无红色出现,再加入二苯***试剂,若培养液呈蓝色,则表示该培养液中***盐未被转化,溶液中无反硝化细菌;若无色,则表示***盐和刚生成的亚***盐都已原
成氮氧化物,说明该溶液中具有较强好氧反硝化功能的细菌。
从十二里河的污泥中筛选到20株生长比较旺盛，反硝化能力较强的好氧反硝化细菌，分别接入含有***钾的LB培养基中培养2-3d通过格里斯试剂检测菌株的反硝化速度，先有无色——粉红色——玫瑰红色——棕色——无