文档介绍：血球计数板的使用
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①血球计数板的原理和构造
②方法与步骤
第二页，共四十页。
①血球计数板的原理和构造
Ⅰ构造
血球计数板是一种专门用于计算较大单细胞微生物的一种仪器，由一块比普便于计数，可将藻液用消毒海水稀释后进行计数。
在计数有鞭毛或有运动性的藻类时，可先吸取定量的藻液，滴加鲁哥氏碘液（1000毫升藻类用15毫升的鲁哥氏液固定）进行固定，然后添加消毒海水稀释后计数。
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将计数板连同盖玻片一起取下，用细口胶头滴管吸取稀释后的摇匀的单胞藻悬液，迅速将吸管尖靠在计数池上盖玻片的边缘，略挤胶头滴管让培养液利用液体的表面张力，自行渗入。
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样品流入的量以充满盖玻片下面的空间为宜，盖玻片下面不能有气泡存在，否则会造成计数不准。多余的藻液会流入H形的凹沟中。
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样品添加到计数池后，静置5min。使藻细胞沉降，否则，细胞呈悬浮状态，不处于同一平面上，给计数造成不便。待单胞藻全部沉降到计数室底部后，将计数板放在载物台的中央，先在低倍镜下找到计数室所在位置后，再转换高倍镜观察，仔细调焦，同时调节光栅，必要时调节光源和反光镜角度，直至细胞和纵横格线都清楚。计数并记录。
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如果规格为25格×16格的计数板统计计数池中央大方格内四角及中央中格内(即80个小方格)的单胞藻数，并记录。
计数时，小心移动载物台，从上到下，由左及右又由右及左依次计数各小格内的细胞数。一般可采取“数上线不数下线，数左线不数右线”的原则处理。凡压方格的上线和左线的细胞，统一算此方格内的细胞，而压方格的下线和右线的细胞，统一不算此方格内的细胞。
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如果一个小方格内单胞藻过多，难以数清，应当对培养液进行稀释以便于单胞藻的计数。
具体方法是：摇匀试管，取1mL单胞藻培养液，加入成倍的无菌水（消毒海水）稀释，稀释n倍后，再用血球计数板计数，所得数值乘以稀释倍数。以每小方格内含有4—5个单胞藻细胞为宜。特别是在培养后期的样液需要稀释后计数。
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计数一个样品要从两个计数室中计得的平均数值来计算，将计数板及盖玻片用流水冲洗，吹干，擦净，重复上述步骤，对每个样品计数三次，再取其平均值。
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N1=(n1-1+n1-2)/2
计数一个样品要从两个计数室中计得的平均数值来计算。
n1-1
n1-2
N1=(n1-1+n1-2)/2
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N2=(n2-1+n2-2)/2
计数一个样品要从两个计数室中计得的平均数值来计算。
n2-1
n2-2
N2=(n2-1+n2-2)/2
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N3=(n3-1+n3-2)/2
计数一个样品要从两个计数室中计得的平均数值来计算。
n3-1
n3-2
N3=(n3-1+n3-2)/2
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将计数板及盖玻片用流水冲洗，擦干，重复上述步骤，对每个样品可计数三次，再取其平均值。
N1=(n1-1+n1-2)/2
N2=(n2-1+n2-2)/2 N=(N1+N2+N3) /3
N3=(n3-1+n3-2)/2
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将同一样品的计数结果，取平均值。代入下式，求算单胞藻的密度：
N小格平均每小格内的细胞数=N/(5×16)
设每毫升中有x个单胞藻
x个 N小格×16×25个
1cm3 (1mm × 1mm × ÷1000)cm3
x个 = N/(5×16) ×16×25个
1cm3 (1mm × 1mm × ÷1000)cm3
x = N/(5×16) ×16×25个× 1cm3 × 1000÷ (1mm × 1mm × )
=50000 N
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血球计数板的清洁
计数完毕，将血球计数板用自来水冲洗，切勿用硬物洗刷，
洗后自行晾干或用吹风机吹干，或用95%的乙醇、无水乙醇、***等有机溶剂脱水使其干燥。
通过镜检观察每小格内是否残留菌体或其他沉淀物。若不干净，则必须重