文档介绍：流式细胞术实验技巧及数据分析
第一页，共五十一页。
BD公司不同型号流式细胞仪
FACSCalibur
LSRII
FACSAria
FACSCount
FACSVantage&DiVa
FACSCant
双或多参数荧光抗体的组合标记
FITC+PE 488 525 、575 绿色、橙色
FITC+T red 488 525 绿色
568 615 红色
FITC+PeCy5 488 525、 675 绿色、 红色
FITC+ ECD 488 525、 625 绿色、橙红色
F+P +PeCy5 488 525、575、675 绿、橙、红色
F+ ECD +PeCy5 488 525、575、675 绿、橙红色、红色
F+P +PeCy5 +APC 488 525 、 575 绿色、橙色
633 670 红色
荧光染料 激发波长（nm) 发射波长（nm) 颜色
第十六页，共五十一页。
用化学法将两种不同激发波长的染料结合在一
起，在488nm波长激发光激发后产生的发射波长
激发另一荧光染料产生的荧光信号。
Laser
CY7
755
PE
ECD
620
CY5
670
488nm
能量传递染料：
第十七页，共五十一页。
流式细胞术操作流程：
培养细胞
新鲜组织
石蜡包埋
单细胞悬液
制备
荧光抗体标记
上机检测
表型测定
细胞分选
继续培养
FISH
PCR
统计学分析
第十八页，共五十一页。
单分散细胞
第十九页，共五十一页。
FSC
FSC信号的强弱与细胞的大小和活力相关
第二十页，共五十一页。
SSC
SSC信号的强弱与细胞内颗粒多少相关
第二十一页，共五十一页。
细胞散色光信号
第二十二页，共五十一页。
细胞荧光测量
细胞的自发荧光 未经染色的样品细胞
在激发光的照射下可测到有微弱的荧
光信号.
细胞的特异性荧光 经过各种特异染色的
细胞在激发光的照射下可测到较强的荧光
信号.
第二十三页，共五十一页。
自发荧光信号与特异染色的荧光信号分析图
自发荧光信号
第二十四页，共五十一页。
特异染色的荧光信号
第二十五页，共五十一页。
DNA分析比较
第二十六页，共五十一页。
排除双联体细胞
第二十七页，共五十一页。
细胞阻滞在G2M期
第二十八页，共五十一页。
双克隆细胞周期分析
第二十九页，共五十一页。
溴脱氧尿嘧啶核苷( Bromodeoxyuridine，
BrdUrd )是胸苷的一种类似物。它可以替代
胸腺嘧啶掺入到细胞新合成的DNA分子中，成为S
期细胞的一种标记物。流式细胞术采用抗BrdUrd
单克隆抗体免疫荧光和PI双参数检测细胞，不仅
可检测一个细胞群体的动力学参数和DNA含量，同
时可以了解不同细胞的DNA合成能力高低。
BrdUrd和DNA双标记染色
第三十页，共五十一页。
第三十一页，共五十一页。
BrdUrd与PI检测
第三十二页，共五十一页。
BrdUrd与PI检测
第三十三页，共五十一页。
BrdUrd与PI检测
第三十四页，共五十一页。
细胞三色荧光检测
第三十五页，共五十一页。
细胞因子测定
*检测T细胞(CD69)活化
第三十六页，共五十一页。
G6=R1*R5
第三十七页，共五十一页。
*CD4抗原分子结构引起CD4荧光强度下调
第