文档介绍：实验十二微生物大小的测定
水生态工程实验室
目的要求
学****并掌握用测微尺测定微生物大小的方法
掌握对不同细菌细胞大小测定的分类学基本要求
增强微生物细胞大小的感性认识
基本原理
由于菌体很小,需在显微镜下测量,借助特殊的测量工具——显微测微尺,包括:目镜测微尺和镜台测微尺
镜台测微尺
是一个在特制载玻片中央封固的标准刻尺,
总长为1mm,共分为100个小格,
目镜测微尺
是一块圆形玻片,其中央刻有精确等分的刻度,有把5毫米刻成为50等分或把10毫米长度刻成100等分。测量时,将其放在接目镜中的隔板上来测量经显微镜放大后的细胞物象。
实验步骤
装目镜测微尺
取出目镜,把目镜的透镜旋
下,将目镜测微尺刻度朝下
放在目镜镜筒内的隔板上,
旋上目镜透镜,然后将目镜
插入镜筒内。
2 校准目镜测微尺
放镜台测微尺:镜台测微尺置于载物台上,使刻度朝上。
校准:先用低倍镜观察,对准焦距,视野中看清镜台测微尺的刻度后,转动目镜,使目镜测微尺与镜台测微尺的刻度平行,移动推动器、使两尺重叠,再使两尺在某一区域内两刻度线完全重合,计数两重合刻度之间目镜测微尺的格数和镜台测微尺的格数。
用同样的方法换成高倍镜和油镜进行校正,分别测出高倍镜和油镜下,两重合线之间两尺分别所占的格数。
校准目镜测微尺
注意:
观察时光线不能太强,否则难以找到镜台测微尺的刻度
换高倍镜和用油镜校正时,眼睛注视着镜头和载物台,
防止压坏镜台测微尺!
计算:
不同放大倍数下,目镜测微尺每格所代表的长度:
两重合线间镜台测微尺格数*10um
目镜测微尺每格长度(um)= ———————————————————
两重合线间目镜测微尺格数
校正完后取下镜台测微尺,换上所需观察的菌体制片,细菌用简单染色;测定酵母菌时制成水浸片也可以用美蓝染色
先用低倍镜观察找到菌体,然后选择合适的倍镜观察,在不同倍镜观察到的格数分别乘上校正后不同倍镜目镜测微尺每格所代表的长度,即为菌体的实际大小!
一般情况下,细菌需用油镜观察,酵母菌用高倍镜观察即可;对于球菌就用直径表示菌体大小,杆菌则需要分别测量细胞的宽度和长度,用宽度×长度表示细胞大小
3 菌体大小的测定
实验材料
菌种: 金黄色葡萄球菌
枯草芽孢杆菌
酿酒酵母菌
仪器: 目镜测微尺
镜台测微尺
载玻片
盖玻片
显微镜
染液:草酸铵结晶紫吕氏碱性美蓝
不是直接测量细胞的大小!
而是用于校正目镜测微尺的相对长度
镜台测微尺