胰岛素工艺流程说明.docx

文档介绍：This manuscript was revised on November 28, 2020
胰岛素工艺流程说明
重组人胰岛素产品生产工艺流程
菌种扩培
This manuscript was revised on November 28, 2020
胰岛素工艺流程说明
重组人胰岛素产品生产工艺流程
菌种扩培
对从菌种库中取出的菌种进行活化及初步扩大培养
种子罐培养
在种子罐中对菌种进行进一步的扩大培养，至菌种到对数生长期
时转入发酵罐培养
发酵罐培养
分两阶段进行控制，第一阶段主要通过控制溶氧和补加甘油使菌
体达到富集的目的，第二阶段通过补加甲醇使菌体进行高密度表
达目的产物，HPLC检测目的产物含量
发酵液固液分离
目的产物存在于发酵液上清中，此步骤主要控制目的产物收率
P1纯化
通过两步柱层析，分别去除发酵上清液中的色素和杂蛋白
利用紫外检测仪控制目的产物收率，主要试剂为乙醇与异丙醇
P1沉淀、干燥
调节PH值，使P1沉淀，再经离心干燥，得中间体I固体
P2纯化
控温进行转肽反应，主要试剂为DMSO与1,4-丁二醇
再通过柱层析进行提纯，主要试剂为异丙醇
P2沉淀、干燥
调节PH值，使P2沉淀，再经离心干燥，得中间体II固体
脱帽
通过控制湿度与温度进行脱帽反应，得到终产物胰岛素
主要试剂为***，产品为半固体
成品粗纯化
经过两步柱层析对胰岛素进行提纯，试剂为Tris-HCl和异丙醇
通过超滤对提纯后的胰岛素进行浓缩，通过管道传递到下工序
成品精纯化
通过制备色谱对胰岛素粗品进行精制，主要试剂为色谱乙***
然后经两步结晶后通过管道过滤除菌到百级区
过滤冻干
对胰岛素成品进行一次结晶和水洗
对水洗后的胰岛素进行过滤除菌后冻干，即得胰岛素成品
重组人胰岛素生产工艺流程功能间分布
工序
功能间名称
主要操作
菌种
菌种室
菌种储藏
培养基准备间
培