文档介绍：姓名：王亚斌
实验报告
班级：生物技术12（1）
学号：20**********
实验一：淋巴细胞的分离
成
绩
优秀
良好
中等
及格
不及格
、实姓名：王亚斌
实验报告
班级：生物技术12（1）
学号：20**********
实验一：淋巴细胞的分离
成
绩
优秀
良好
中等
及格
不及格
、实验目的
熟悉人外周血淋巴细胞的组成
熟悉人外周血淋巴细胞分离的方法
熟悉密度梯度离心法分离淋巴细胞的原理和方法
二、方法步骤、观察内容
1、采静脉血2ml加入抗凝管，轻轻摇动试管，混匀，5min后加入Hank's液2ml,手动轻轻摇匀。
2、将抗凝血全部沿管壁缓慢加至另一含2ml淋巴细胞分离液管的液面上，注意保持两种液体界面清晰。
3、将试管平衡后置水平式离心机，lOOOrpm离心20min。
4、用毛细吸管仔细吸取血浆与分层液界面处淋巴细胞层至一刻度离心管内。
5、加入5倍体积的Hank's液，手动旋转试管使液体混匀，lOOOrpm离心10min,弃上清，沉淀即主要为淋巴细胞（或单位个核细胞）。加入含10%灭活小牛血清Hank's液1ml，混匀后进行计数。
（备注：如做淋巴细胞转化或其它培养，所用试剂、器材应是无菌的。）
6•细胞存活率检测：%台昐蓝染色液10ul，混匀。取10ul加入血细胞计数板，精制片刻，置显微镜高倍镜下观察。
三、观察结果
利用显微镜观察如上图所示。单个核细胞总数=（四个大方格中单个核细胞总数/4）x稀释倍数x细胞悬液毫升数xlO的四次方利用细胞计数方法得知总细胞数为639.
根据细胞存活率=活细胞数/（活细胞+死细胞）xl00%=（639-26）/639=96%活细胞不折色，折光性强。死细胞由于染料可渗入细胞内，故死亡细胞染成蓝色，死细胞体积较大，无光泽。
四、分析讨论
人外周血中的淋巴细胞组成？
根据细胞的表面标志分离淋巴细胞的原理是什么？
：血液循环中的淋巴细胞。主要由T细胞（占70%〜80%）和B细胞（占20%〜30%）组成
：外周血中单个核细胞和单核细胞,其体积、,用它做密度梯度离心，使一定密度的细胞按相应密度梯度分布,从而将各种血细胞加以分离.
实验报告二
姓名：王亚斌
班级：生物技术12（1）班
学号：20**********
实验二：E-玫瑰花环形成实验
成
绩
优秀
良好
中等
及格
不及格
一、实验目的
掌握人T淋巴细胞形成E-花环的实验原理和操作方法。
熟悉T淋巴细胞的功能检测方法。
二、方法步骤、观察内容
1、取肝素抗凝血1〜2ml,用分层液分出淋巴细胞并洗涤，用Hanks液调整细胞浓度为2—。
2、取小试管加入lml淋巴细胞悬液及1%,混匀置37°C水浴箱5分钟。
3、800〜1000r/min低速离心5分钟，放