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藤县松材线虫病普查技术方案
为保护我县森林资源安全和造林绿化成果，促进经济和生态建设稳步发展，遏制松材线虫病严重发生和扩散蔓延的势头，提高防治成效，根据《国家林业和草原局关于印发新修订的〈松材线虫病防尚未腐朽）。
（记录样品号、采集地点、树种、树龄、取样时间和取样人等）。并填写取样记录表见附表3。
（二）抽样数量
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以林业小班为单位，表现典型症状的松树在10株以下时全部取样；10株以上时先抽取10株，再选取其余数量的1%－5%。
（三）样品的保存与处理
取回的样品应及时分离鉴定，若需要保存可采取以下方法：将木片装入塑料袋内，扎紧袋口，在袋上扎几个小孔（也可直接保存木段、圆盘），放入4℃冰箱。若需长期保存，要经常在样品上喷水（一般在半个月至1个月内完成分离鉴定）。
样品分离鉴定结束后应及时对样品进行销毁。
松材线虫普查监测工作具体技术操作规程参见国家标准《松材线虫普查监测技术规程（GB/T 23478—2009）》。
四、分离鉴定
（一）线虫分离
将取回的样品在室内采用贝尔曼漏斗法或浅盘法进行线虫分离，分离时间一般需12小时以上。将分离液体收集到试管或烧杯中，通过自然沉淀或离心后进行镜检。
（二）线虫培养
疫木保温保湿培养：将样品锯成小段，置于烧杯中加少量清水，木段下端浸在水中，木段上端用湿纱布覆盖，在30℃条件下保温保湿培养3天，倒取杯中水液，可获得较多雌雄成虫；或将样品木段适当浸湿，放于塑料袋里，扎紧袋口，置于30℃培养箱中3天取出重新分离，可获得较多雌雄成虫。
（三）玻片的制作
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在洁净的载玻片中央滴一水滴，水滴的量以加盖玻片后恰好充满盖玻片下的空间为好。用细针挑取，或用毛细滴管吸取线虫置于载玻片的水滴中，并使之沉底。将有线虫的载玻片在酒精灯的火焰上往返通过5－6秒，杀死线虫。用细针摆好水滴中的死线虫，然后用镊子夹盖玻片从一侧轻轻盖下。
（四）鉴定
（仅适用于雌雄成虫，以雌成虫为主）：将制作好的玻片置于显微镜下观察其形态，判别是否为松材线虫，并填写镜检记录表，见附表3。
松材线虫分离、培养、镜检技术操作规程参见国家标准《松材线虫病检疫技术规程（GB/T 23476—2009）》
2．分子检测（适用于各虫态）：松材线虫的分子检测技术采用实时PCR检测技术。
五、数据整理与上报
（一）数据整理
普查数据以县级为单位进行普查数据汇总（附表4、5），普查数据汇总到乡镇级行政区级别，由县级汇总到市级，并上报至自治区防治检疫站。
（二）材料上报
，形成普查工作总结（包括附表4、5）分别于6月15日前、11月10日前上交电子版与纸质版到自治区防治检疫站。
，PDA/GPS记录的踏查线路航迹、踏查地点、详查地点经纬度，导入广西林业有害生物GIS信息管理系统中，按要求规范命名后从系统上报。
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附表：1. 松材线虫病踏查记录表
2. 松材线虫病普查诱捕器记录表
3. 松材线虫病采样鉴定记录表
4. 松材线虫病监测普查统计表
5. 松材线虫病发生情况统计表
附表1 松树枯死木（松材线虫病）踏查记录表
县（区、林场）名称： 乡镇（分场）名称： GPS航迹名称： 里程（km）：
序号
调查日期
踏查点
踏查点地理坐标
松树种类
松树枯死数量（株）
枯死原因分析
采样数量
（株/号）
经度
纬度
海拔（m）
调查人： 填表时间： 年 月 日
注：踏查点为踏查中发现松树枯死地点。
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附表2 松材线虫病普查诱捕器记录表
编号
悬挂地点
坐标点
诱心更换时间
诱捕器收虫
采样分离数
分离鉴定结果
时间
松褐天牛
其它天牛
无