文档介绍：微生物学实验三
PROFESSIONAL GENERATION GRADUATION REPORT
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汇报人：
工作部门：
一、实验目的
。
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汇报人：
工作部门：
一、实验目的
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抗 酸 染 色
Acid fast stain
分枝杆菌的细胞壁内含有大量的脂质，主要是分枝菌酸，它包围在肽聚糖的外面，所以分枝杆菌一般不易着色，要经过加热和延长染色时间来促使其着色。但分枝杆菌中的分枝菌酸与染料结合后，就很难被酸性脱色剂脱色，故名抗酸染色。
齐-尼氏抗酸染色法是在加热条件下使分枝菌酸与石炭酸复红牢固结合成复合物，用3%盐酸酒精处理也不脱色。当再加碱性美兰复染后，分枝杆菌仍然为红色，而其他细菌及背景中的物质为兰色。
二、实验原理
细菌：卡介苗 （Bacillus Calmette-Guerin， BCG）
染液：石炭酸复红液、3%盐酸酒精、碱性美 兰溶液
其它：接种环、酒精灯、载玻片等
三、实验材料
1、细菌涂片的制备
涂片 干燥 固定
2、染色
1）初染：用玻片夹夹持涂片标本，滴加石炭酸复红2-3 滴，在火焰高处徐徐加热，切勿沸腾，出现蒸汽即暂时离开，加热3～5min，若染液蒸发减少，应再加染液，以免干涸，待标本冷却后用水冲洗。
2）脱色： 3%盐酸酒精脱色30s～1min；用水冲洗。
3）复染：用碱性美兰溶液复染1min；用水冲洗后用吸水纸吸干。
四、方法与步骤
五、实验结果
未染色 初染后 脱色后 复染后
初染
脱色
复染
石炭酸复红
盐酸酒精
碱性美兰
结核杆菌呈红色，常堆积成团，排列无序，偶呈分枝状生长。背景及非抗酸性细菌呈兰色。
六、注意事项
1、无菌操作
2、染色时间
3、初染加热的温度，勿沸腾
病毒的接种与培养 真菌菌落形态观察
4、接种：右手拿注射器在小白鼠颞部（眼与耳根联线的中点略偏耳朵的方向）注入，进入颅腔即可，（一般进针2－3mm）不要插得太深。
5、观察：注射完毕，将用过的注射器放入煮沸消毒器内，煮沸消毒。实验动物置于防蚊设备的室内饲养，逐日观察动物发病情况。
处死小白鼠-颈椎脱臼法
接种途径
可根据病毒种类选择适宜接种部位，如分离流感病毒常用羊水囊和尿囊同时接种法，而痘病毒常采用绒毛尿囊膜接种法
尿囊腔接种法
卵黄囊接种法
绒毛尿囊膜接种法
羊膜囊接种法
常用鸡胚分离或鉴定的病毒
病 毒
接种途径
接种后变化
血清学诊断所用材料
痘苗病毒
绒毛尿囊膜
痘斑
产生痘斑的绒毛尿囊膜
单纯疱疹病毒
绒毛尿囊膜
白斑、核内包涵体
尿囊液
流感病毒
羊水囊、尿囊
产生血凝素
尿囊液
腮腺炎病毒
羊水囊或卵黄囊
产生血凝素
羊水
判断鸡胚是否存活
⑴在检卵灯下观察能否看到清晰的血管；
⑵胚胎是否移动；
⑶若胚龄过长，则需观察其胎盘部分，胎盘部分变苍白说明胚胎死亡，正常时胎盘发暗，蛋白部分透亮。
判断鸡胚是否存活
气 室
鸡 胚
卵黄囊
尿囊腔
羊膜腔
绒毛尿
囊 膜
卵 白
卵膜
鸡胚结构示意图
卵膜
绒毛尿囊膜接种法
定位：将胎盘部分
及自然气室部分用记号
笔画出，在离开胎盘与大血管区画一直径约1cm的等边三角形
卵窗
取卵壳：依次用碘酊，酒精消毒记号处，用锯片将标记三角区卵壳锯穿，（注意勿损伤卵壳下各层膜组织），取下所画三角形区域的卵壳，（注意卵壳下各层膜组织），然后用针尖轻轻将暴露的卵膜中心刺破一个小口（不要伤及绒毛尿囊膜）。
造人工气室：在自然气室部分消毒后用锥子或大注射器针头在气室正中钻一孔，用橡皮头自气室端小孔将气室中空气吸出，使绒毛尿囊膜下陷形成一“人工气室”。
接种：去除卵膜，~ 。
封口：用胶布封口，胶布事先用碘酒消毒，并通过火焰烧去余碘。
培养：放入温箱培育4天，然后收获病毒。
（示教）
真菌培养营养要求不高，在一般培养基上能生长
常用沙保弱（Sabouraud）培养基（含4%葡萄糖、10%蛋白胨、琼脂、~），~，最适生长温度浅部真菌22~28℃ 深部真菌37℃ 。
真